ANNEXE
Annexe 1 : Technique de coloration de GRAM
- Recouvrir le frottis du violet de Gentiane ;
- Laisser agir pendant une minute ;
- Rincer à l'eau de robinet et égoutter ;
- Recouvrir le frottis de la solution de lugol ;
- Laisser agir une minute ;
- Rincer à l'eau de robinet ;
- Décolorer le frottis à l'alcool pendant une
minute ;
- Laver à l'eau et égoutter ;
- Recouvrir le frottis de fuchsine phéniquée
;
- Laisser agir pendant 20 s ;
- Laver à l'eau et égoutter ;
- Laisser sécher à l'air ;
- Observer à l'objectif x100 avec de l'huile à
immersion.
Annexe 2 : Score de Nugent
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Forme Gardnerella et
Forme Lactobacillus (grands
Bactéroïdes (petits bâtonnets
à
Score bâtonnets Gram positif)
Gram variable et bâtonnets
Gram négatif)
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Forme Mobiluncus
(bâtonnets courbes à
Gram
variable)
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0
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4+
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0
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0
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1
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3+
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1+
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1-2+
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2
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2+
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2+
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3-4+
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3
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1+
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3+
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4
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0
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4+
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0 ; 0
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Score 0-3 ; normal
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1+ ; < 1
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Score 4-6 ; intermédiaire
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2+ ; 1-4
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Score =7 ; vaginose bactérienne
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3+ ; 5- 30
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4+ ; = 30
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PREVALENCE DES VAGINITES ET VAGINOSES CHEZ LES FEMMES ADMISES AU
CHU-MEL DE JANVIER 2021 A MARS 2023
Annexe 3 : Préparation des milieux de
culture
V' Gélose au sang frais additionnée d'acide
nalidixique et de colistine
- Laisser refroidir à 45-50°C la gélose
Columbia préalablement préparée ;
- Ajouter 5% de sang de mouton défibriné
stérile, le mélange ANC et poly vitex
- Bien homogénéiser et couler en boîte de
Pétri ;
- Laisser solidifier et conserver au réfrigérateur
à 4°C.
V' Gélose Trypticase soja
- Mettre 30g de poudre dans un litre d'eau distillée ;
- Mélanger soigneusement jusqu'à dissolution
complète ;
- Répartir en tubes ou en flacons. Stériliser
à 121°C pendant 15 minutes.
V' Gélose Sabouraud
- Suspendre 65,0g dans un litre d'eau distillée ; -
Chauffer jusqu'à la dissolution totale ;
- Autoclaver à 121°C pendant 15 minutes.
V' Gélose chocolat
- A partir de la gélose Columbia préalablement
préparée, et non refroidie ajouter 5mL de
sang de mouton à 5% et 5mL de sang de poly vitex
- Mélanger et couler en boîte de pétri.
V' Gélose Mueller-Hinton
- Mettre 36g de poudre dans un litre d'eau distillée ;
- Porter à l'ébullition jusqu'à dissolution
complète ;
- Stériliser à l'autoclave à 121°C
pendant 15minutes et répartir en tubes ou flacons.
V' Gélose Columbia
- Prélever 39g de gélose Columbia ;
- Dissoudre dans 1L d'eau distillée ;
- Bouillir, Autoclaver à 121°C pendant 15minutes.
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