7. Recherche de l'activité progestative du
macéré aqueux des feuilles
de H. floribunda
La recherche de L'activité progestative a
été réaLisée par La mise en évidence de La
réaction déciduaLe seLon La méthode de Finn et Martin
(1972). L'étude a consisté dans
un premier temps à rechercher La forme de
soLubiLité de La progestérone (LiposoLubLe ou hydrosoLubLe) et Le
temps d'administration optimum de La progestérone qui mettent nettement
en évidence La réaction déciduaLe par L'apparition de
sites d'impLantation des bLastocystes. Et dans un second temps de rechercher
L'activité progestative et/ou antiprogestative des extraits aqueux des
feuiLLes de H. floribunda.
7.1 Recherche de la solubilité appropriée de
la progestérone (liposoluble et
hydrosoluble) et du temps optimum d'administration (4 jours
et 7 jours)
Deux formes de progestérone, La progestérone
LiposoLubLe et La progestérone hydrosoLubLe sont utiLisées afin
de retenir La forme La pLus active pour Les tests uLtérieurs. Pour ces
deux formes de progestérone, des traitements de quatre (4) jours et de
sept (7) jours de durée sont arrêtés afin de choisir Le
temps optimum d'induction de La réaction déciduaLe.
7.1.1 Traitement de quatre (4) jours avec la
progestérone liposoluble et la progestérone hydrosoluble.
Pour La durée de traitement de quatre(4) jours,
on a constitué trois(3) Lots de dix(10) souris:
Lot I : Témoin recevant de L'eau distiLLée (ED).
Lot II : Animaux recevant La progestérone LiposoLubLe
Lot III : Animaux recevant La progestérone
hydrosoLubLe.
Le premier jour de L'administration des substances est
désigné comme J1. Pendant 3 jours consécutifs (J1, J2,
J3), Les souris reçoivent 0,1 mL de 17-â oestradioL à 10
ìg/mL (SIGMA, France) par voie sous cutanée. Ce traitement permet
La préparation de L'utérus à répondre aux hormones
impLiquées dans L'impLantation des embryons.
Le traitement est ensuite suspendu pendant Les 2 jours
suivants (J4 et J5) qui correspondent à La période de L'oestrus
vaginaL. Aux jours J6, J7 et J8, on réaLise quotidiennement, en pLus des
0,1 mL d'oestradioL 17- â (à 1 mg/mL), une injection de 0,1 mL de
progestérone LiposoLubLe (à 1 mg/mL) (SIGMA, France) pour Le Lot
II et hydrosoLubLe pour Le Lot III.
Dans L'après midi de J8, période
théoriquement de sensibiLité maximaLe de L'utérus
(Hetherington, 1968), iL est procédé à une instiLLation
intra-utérine (sous anesthésie généraLe à La
kétamine) de 20 ìL d'huiLe d'arachide dans La corne droite de
L'utérus (Enders et Given, 1977). La corne gauche étant
considérée comme témoin, eLLe ne reçoit pas d'huiLe
d'instiLLation mais est sujette aux mêmes manipuLations et traitements
que La corne opposée. La présence d'huiLe dans La cavité
utérine mime La présence de L'embryon et induit par
conséquent La réaction déciduaLe.
Au neuvième jour (J9), iL est administré
à chaque sujet, 0,1 mL de progestérone LiposoLubLe (à 1
mg/mL) pour Le Lot II et 0,1 mL de progestérone hydrosoLubLe (à 1
mg/mL) pour Le Lot III.
A J10, Les souris sont sacrifiées par disLocation
cervicaLe et iL est procédé aux différents examens et
observations. A cet effet, iL est apprécié La
perméabiLité de La muqueuse utérine et L'accroissement du
poids utérin. Pour La perméabiLité ou La présence
de sites d'impLantation, iL est injecté de manière intraveineuse
(au niveau du coin de L'oeiL), 150 ìL du "CHICAGO SKY BLUE 6B" (Sigma,
France) après anesthésie généraLe à La
kétamine (CLorkétam 1000 ; 10 mg/kg). Grâce à La
diffusion du coLorant dans Le tissu utérin, on visuaLise directement La
perméabiLité vascuLaire par L'apparition de spots bLeus
simiLaires à des sites d'impLantation des embryons. Dix (10) minutes
après, Les souris sont sacrifiées par disLocation cervicaLe, puis
L'utérus est préLevé et pesé. IL est compté
Le nombre de sites d'impLantation dans La corne instiLLée. La corne
instiLLée et La corne non instiLLée sont séparées
et pesées. La différence de poids entre ces deux cornes donne Le
poids du déciduome. Le protocoLe d'administration est consigné
dans Le tabLeau VI.
Tableau VI : Protocole
d'administration de la progestérone liposoluble et hydrosoluble pendant
une période de quatre(4) jours.
|
Lots
|
n
|
|
|
|
Jours de traitement
|
|
|
|
|
J1
|
J2
|
J3
|
J4 J5 J6
|
J7
|
J8
|
J9
|
J10
|
I: témoin
|
10
|
ED
|
ED
|
ED
|
- - ED
|
ED
|
ED(i)
|
ED
|
K
|
II: P4, lipo
|
10
|
E
|
E
|
E
|
- - P4+e
|
P4+e
|
P4+e(i)
|
P4
|
K
|
III: P4, hydro
|
|
10
|
E
|
E
|
E
|
- - P4+e
|
P4+e
|
P4+e(i)
|
P4
|
K
|
|
ED : eau distillée ; E : oestradiol à 10
ìg/ml; e : oestradiol à 1 ìg/ml ; P4, lipo :
progestérone liposoluble ; P4, hydro :progestérone hydrosoluble ;
K autopsie ; i: instillation
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