III.2. PROTOCOLES DU CRIBLAGE CHIMIQUE
Sous ce label sont décrits, différents principes
ainsi que les protocoles ayant permis de réaliser le criblage
chimique.
III.2.1. LES ALCALOÏDES
III.2.1.1. Principe
La mise en évidence des alcaloïdes consiste
à les précipiter à l'aide de six réactifs de
précipitation (Bruneton, 2009).
III.2.1.2. Mode opératoire
1g de poudre de matière végétale
sèche est mise à macérer dans 10 ml de méthanol
à température ambiante pendant 24 heures. La solution obtenue est
filtrée, puis lavée avec de portions de méthanol chaud, et
est évaporée à sec à l'étuve à
50°C.Le résidu est recueilli deux
III.2.3.1.Principe
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fois par 2 ml de solution chaude d'acide chlorhydrique 1 % et
est ensuite filtré. La solution acide obtenue est alcalinisée par
l'ammoniaque concentrée dans une ampoule à décanter.
Ajouter 15 ml de chloroforme dans l'ampoule à décanter qui. Deux
phases se forment. Agiter puis reposer pour séparer les phases.
Répéter trois fois cette opération. La phase organique est
évaporée à sec à l'air libre et le résidu,
repris par 0,5 ml de chloroforme, est transféré dans un tube
à hémolyse. Ajouter dans ce tube 0,5 ml de HCl 1% et agiter. Les
alcaloïdes ayant été protonés sont supposés se
trouver dans la phase aqueuse. Celle-ci, qui est au- dessus, est
prélevée à l'aide d'une pipette Pasteur. Six gouttes en
sont déposées sur une lame porte-objet. Chacune de ces gouttes
est traitée par l'un des six réactifs de précipitations
décrits en annexe. La présence d'alcaloïdes n'est
considérée comme certaine que si chacun des six réactifs
donne un précipité. La méthode permet de détecter
jusqu'à des teneurs d'alcaloïdes inférieures à 0,01%
sur une prise d'échantillon de 1g.
III.2.2. LES FLAVONOÏDES ET LES
LEUCOANTHOCYANES
III.2.2.1. Principe
L'extrait aqueux flavonoïque donne, en présence de
l'acide chlorhydrique concentré et de copeaux de magnésium, une
coloration rose-rouge et rouge violacée dans la couche surnageant
d'alcool iso amylique. Après chauffage au bain-marie, sans ajouter le
magnésium, 1'apparition d'une coloration rouge indique la
présence de leuco anthocyanes. (Bakari,
2010).
III.2.2.2. Mode opératoire
5 g de matériel végétal placés
dans un erlenmeyer sont infusés dans 50 ml d'eau distillée
pendant 30 minutes. Après filtration, 5 ml de filtrat sont
traités par l'alcool éthylique à 97 %, puis on y ajoute
successivement 5 ml d'eau distillée, 5 ml de HCl, quelques gouttes
d'alcool iso amylique et 0,5g de copeaux de magnésium.
La coloration rose-orangé, rouge ou rouge violet
apparaît dans la couche surnageant si la solution contient les
flavonoïdes.
De même, la réaction effectuée pendant
deux minutes au bain-marie en l'absence de copeaux de magnésium permet
la caractérisation de leuco anthocyanes lorsqu'apparaît une
coloration rouge.
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