b) Préparation des solutions
mères et des dilutions
o Préparation des solutions
mères
Les solutions mères de chaque extrait des fractions
isolées ont été préparées à une
concentration équivalente à 1 mg/mL de poudre lyophilisée
de BEAT-SS®. Pour avoir cette concentration pour chaque fraction il nous a
fallu tenir compte des facteurs de proportionnalité figurant dans le
Tableau 4 qui rendent compte de la proportion de chaque fraction par rapport
à la poudre lyophilisée de BEAT-SS® de départ.
Ainsi pour préparer un volume de 5 mL pour chacune des
fractions, chaque quantité m à peser fut dissoute sous
sonication dans quelques mL de solution physiologique (NaCl 0,9%) contenue dans
un micro tube et la solution fut portée au volume à 5 mL avec du
NaCl 0,9%. Le Tableau 5 présente de manière explicite le mode de
préparation.
 
avec m : quantité à peser en mg
f : facteur de proportionnalité
c : concentration qui est de 1 mg/mL
v : volume de la solution qui est de 5 mL
Tableau 5 : Mode de préparation des solutions
mères
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Fractions
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Facteur de proportionnalité
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Concentration (en mg/mL)
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Quantités pesées
(en mg)
|
Volume final de la solution
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Concentration finale équivalente à la
poudre de départ
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Poudre lyophilisée
de BEAT-SS®
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1
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1
|
5
|
5 mL
|
1 mg/mL
|
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Résidu sec de la solution
éthéro-méthanolique
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0,1416
|
0,1416
|
0,7080
|
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Résidu sec des saponines brutes
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0,3013
|
0,3013
|
1,5065
|
|
Résidu de la partie insoluble dans MeOH
|
0,5570
|
0,5570
|
2,7850
|
De manière concrète, pour préparer la
solution mère de la fraction éthéro-méthanolique de
concentration 1 mg/mL équivalente à la poudre lyophilisée
de BEAT-SS® : nous avons pesé 0,7080 mg du résidu sec
de la solution éthéro-méthanolique que nous avons dissout
sous sonication dans environ 3 mL de NaCl 0,9% contenu dans un micro tube et la
solution fut portée au volume à 5 mL avec du NaCl 0,9%. Nous
avons procédé ainsi pour chaque fraction, seule la nature des
solutés et leur quantité ont différé. Au total, 4
fractions ont été préparées et
évaluées. Il s'agit de :
- Lyophilisat (L)
- Solution éthéro-méthanolique
(E)
- Saponines brutes (S)
- Partie insoluble dans le méthanol
(I)
o Préparation des dilutions
Pour chacune des fractions, les concentrations
utilisées pour l'évaluation de l'activité
antifalcémiante étaient de 100, 200 et 400 ìg de la poudre
initiale de BEAT-SS® par mL de sang. Pour avoir exactement ces
concentrations dans les extraits à évaluer nous avons
procédé selon le schéma suivant :
Ø Pour 100 ug/mL
800 uL de solution de NaCl 0,9% ont été
mélangés avec 200 uL de la solution mère de l'extrait,
ensuite 50 uL du mélange obtenu précédemment ont
été mélangé avec 50 uL de sang traité par la
solution de Na2S2O5 2%.
Ø Pour 200 ug/mL
600 uL de solution de NaCl 0,9% ont été
mélangés avec 400 uL de la solution mère de l'extrait,
ensuite 50 uL du mélange obtenu précédemment ont
été mélangé avec 50 uL de sang traité par la
solution de Na2S2O5 2%.
Ø Pour 400 ug/ mL :
200 uL de solution de NaCl 0,9% ont été
mélangés avec 800 uL de la solution mère de l'extrait,
ensuite 50 uL du mélange obtenu précédemment ont
été mélangé avec 50 uL de sang traité par la
solution de Na2S2O5 2%.
Au final, nous avons eu 3 concentrations de travail et 4
fractions à évaluer pour 3 échantillons de sang, soit un
total de 36 solutions d'extraits à observer au microscope.
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