II- Méthodes
1- Electrophorèse sur gel d'agarose
Principe:
L'électrophorèse des protéines du
sérum ou d'autres liquides biologiques humains est une analyse
très utile en laboratoire d'analyses cliniques pour rechercher les
modifications du profil protéique. L'agarose, d'utilisation très
facile. Il donne une séparation des constituants sériques humains
en six fractions majeures de mobilités différentes : albumine,
alpha-1 globulines, alpha-2 globulines, bêta globulines et gamma
globulines.
2-Électrophorèse
Capillaire :
Principe : Le système CAPILLARYS
utilise le principe de l'électrophorèse capillaire en solution
libre, qui représente la forme la plus courante de
l'électrophorèse capillaire. Il permet la séparation de
molécules chargées en fonction de leur mobilité
électrophorétiques propre dans un tampon de pH donné, et,
selon le pH de l'électrolyte, d'un flux électro-osmotique plus ou
moins important. Le système CAPILLARYS comprend 8 capillaires en
parallèle, permettant 8 analyses simultanées. Sur ce
système, l'injection dans les capillaires de l'échantillon
(dilué dans le tampon d'analyse) est effectuée à l'anode
par aspiration. La séparation est ensuite réalisée en
appliquant une différence de potentiel de plusieurs milliers de volts
aux bornes de chaque capillaire. La détection directe des
protéines est effectuée à 200 nm côté
cathode. Les capillaires sont ensuite lavés par une solution de lavage,
puis par le tampon d'analyse. Avec le tampon utilisé à pH
basique, l'ordre de migration des protéines sériques est le
suivant : gamma globulines, bêta-2 globulines, bêta-1 globulines,
alpha-2 globulines, alpha-1 globulines et albumine. Chaque fraction contient un
ou plusieurs constituants sériques.
3-Dosage des protides sériques totaux
Ce dosage a été effectué au niveau de
chaque échantillon sérique par la méthode de Biuret sur
l'auto analyseur CX9 de (Synchron clinical system CX9 PRO, BECKMAN COULTER) et
nous a servi pour déterminer les pourcentages des cinq fractions électrophorétiques
(Albumine, alpha1 globulines, alpha2 globulines, beta globulines et Gamma globulines).
4- Paramètres étudiés entre la
méthode sur gel d'agarose sur Hydrasys el la méthode capillaire
sur Capillarys :
4.1- Etude de la corrélation:
Cette étude a été faite par le logiciel
Microsoft Excel 2007.
* Coefficient de corrélation : Ce
coefficient a des valeurs extrêmes de zéro (aucune liaison et
à 1 (liaison maximale), donc plus on se rapproche de 1, plus la liaison
entre les deux paramètres étudiés est importante.
Deux types des profils électrophorétiques
(Normale et pathologique) ont été distingués. Pour chaque
type cinq coefficients de corrélations (R2) et cinq droites
de régression (Y = ax+b) correspond aux cinq fractions (Albumine, alpha1 globulines,
alpha2 globulines, beta globulines et Gamma globulines) effectués sur
Capillarys et Hydrasys ont été déterminés.
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