Memoire Online - Activités larvicides des extraits de plantes sur les larves de moustiques vecteurs de maladies parasitaires

Activités larvicides des extraits de plantes sur les larves de moustiques vecteurs de maladies parasitaires

DEDICACES

Comme symbole d'une profonde gratitude et de dévouement je dédie ce modeste travail en premier lieu :

Et particulièrement à ma très chère mère qui rien au monde ne pourra compenser tous les sacrifices qu'elle a consentis pour notre bien et pour notre éducation, que dieu la garde et lui donne longue vie et une prospère santé pour qu'a mon tour je puisse la combler de tous ce qu'elle mérite.

Qui mon toujours soutenus et mon donnés force pour persévérer dans les pires moments, je vous aime.

Table des matières

Introduction générale.................................................................................	1
Chapitre I : Généralités sur l'utilisation des plantes dans la lutte contre les vecteurs de maladies parasitaires.
I-Les maladies à transmission vectorielle (MTV).............................................	3
1. Les maladies à transmission vectorielle au Maroc ............................................	5
II- Les vecteurs.......................................................................................	5
1. Le moustique........................................................................................	6
1.1 Cycle de développement du moustique ......................................................	6
1.1.2 Phase aérienne .................................................................................	6
1.1.3 Phase aquatique ................................................................................	7
1.2 Classification des moustiques...................................................................	8
1.3 Caractères distinctifs des genres anophélinae et culicinae .................................	8
- Culex pipiens : Espèce de la sous famille des Culicinae ......................................	9
- Anopheles labranchiae : Espèce de la sous famille des Anophelinae .........................	10
III- La lutte contre les maladies à transmission vectorielle.................................	10
1. Lutte anti-larvaire...................................................................................	11
1.1 Les différents moyens de lutte antivectorielle................................................	11
a-Lutte biologique..............................................................................	11
b-La lutte physique.............................................................................	12
c-La lutte chimique............................................................................	12
3.3.1. Les classes d'insecticides utilisés dans la lutte antivectorielle...........................	12
1.3 Pollution et insecticides .........................................................................	17
Iv- les plantes.........................................................................................	18
1-Les huiles essentielles..............................................................................	19
1-1 Généralités.........................................................................................	19
1-1-2 Définition........................................................................................	19
1-2 Histoire de leur utilisation .......................................................................	20
1-3 Activité insecticide : mécanismes d'action...................................................	20
2.1. Principales méthodes d'extraction .............................................................	21
2.1.1. L'entraînement à la vapeur d'eau.................................................................	21
2.1.2. L'hydrodistillation..................................................................................	21
2.1.3. La distillation à vapeur saturée...................................................................	22
2.1.4. L'hydrodiffusion....................................................................................	22
2.1.5. L'expression à froid............................................................................	22
2.2. Autres méthodes d'obtention des extraits volatils ..........................................	22
2.2.1. Extraction par solvants........................................................................	22
2.2.2. Extraction par les corps gras..................................................................	23
3. Préparations des extraits aqueux....................................................................	23
3.1. Infusion...........................................................................................	24
3.2. Décoction............................................................................................	24
3.3. Macération ....................................................................................	24
Chapitre II : Matériel et méthodes
1. Lieu et période de l'étude .........................................................................	25
I- Matériel végétale ...................................................................................	26
1. Choix des plantes...................................................................................	26
2. Identification des plantes .......................................................................	26
3. Récolte des plantes et extraction des huiles essentielles.......................................	26
3.1 Récolte des plantes ..............................................................................	26
3.2 Séchage des plantes .............................................................................	26
3.3 Broyage des plantes ..............................................................................	27
3.4 Extraction des huiles essentielles .............................................................	28
3.5 Analyse de la composition chimique par chromatographie en phase gazeuse et couplage chromatographie en phase gazeuse - spectrométrie de masse ......................	29
II- Matériel biologique..............................................................................	30
1. Choix des larves....................................................................................	30
2. Prospection des gites ..............................................................................	30
3. Collecte et Conservation des larves .............................................................	31
3.1 Collecte des larves ...............................................................................	31
3.2 Conservation des larves ...........................................................................	31
4. Identification entomologique.....................................................................	31
4.1 Traitement au laboratoire.........................................................................	31
4.2 Identification des larves ..........................................................................	31
III- Préparation des extraits des plantes ........................................................	32
1. Préparation des extraits aqueux..................................................................	32
2. Préparation à partir des huiles essentielles ......................................................	32
IV- Tests de toxicité.................................................................................	32
ï Expérimentation 1: Détermination de l'effet larvicide de 6 extraits aqueux...............	32
ï Expérimentation 2: Détermination de l'effet larvicide de 6 huiles essentielles............	33
ï Expérimentation 3: Comparaison entre l'action des extraits de plantes et des insecticides sur les larves de moustiques.........................................................	33
Résultats et discussion
I-Matériel végétale .................................................................................	35
1.1 Identification des plantes ........................................................................	35
1.2 Extraction des huiles essentielles .............................................................	40
1.3 Analyse de la composition chimique par chromatographie en phase gazeuse et couplage chromatographie en phase gazeuse - spectrométrie de masse ......................	40
II-Matériel biologique.................................................................................	44
1. Prospection desgites...............................................................................	44
2. Gîtes étudiés........................................................................................	44
III-Tests de toxicité..................................................................................	45
ï Expérimentation 1: Détermination de l'effet larvicide de 6 extraits aqueux..............	45
ï Expérimentation 2: Détermination de l'effet larvicide de 6 huiles essentielles............	50
ï Expérimentation 3: Comparaison entre l'action des extraits de plantes et des insecticides sur les larves de moustiques.......................................................	55
Discussion................................................................................................	57
Conclusion et perspectives...........................................................................	59

Abréviations et symboles

°C	Degré Celcius
Ö	Diamètre
mg	milligramme
ìl	microlitre
ml	millilitre
g	gramme
mm	millimètre
h	heure
CPG	Chromatographie en Phase Gazeuse
*Cx pipiens*	Culex pipiens
DELM	Direction de l'Epidémiologie et de Lutte Contre les Maladies
DL50	Dose Létale, qui tue 50 %
DL95	Dose Létale, qui tue 95 %
HE	Huiles Essentielle
H.R	Humidité Relative
INPMA	Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques
GC	Gas Chromatography
LRDEHM	Laboratoire Régional de Diagnostic Épidémiologique et d'Hygiène du Milieu
MTV	Maladies à Transmission Vectorielle
OMS	Organisation Mondiale de la Santé
R	Rendement
SM	Spectrométrie de Masse
T°	Température
TH	Taux d'Humidité

Liste des tableaux

Chapitre I : Synthèse bibliographique		Pages
Tableau 1	Maladies transmises par des moustiques et autres diptères piqueurs (OMS, 1999).		4
Tableau 2	Classification des espèces de la famille des culicidae.		8
Chapitre II : Matériel et méthode.
Tableau 3	Concentration d'insecticides utilisés.		33
Résultats et discussion
Tableau 4	Identification botanique des espèces végétales récoltées au niveau de l'INPMA.		35
Tableau 5	Taux d'humidité présent dans la poudre des 6 espèces végétales testées.		38
Tableau 6	Estimation des quantités du résidu sec des 6 espèces végétales testées.		38
Tableau 7	Rendement d'extraction et couleur des 6 huiles essentielles.		40
Tableau 8	Composition chimique de l'HE d'Origanum majorana.		41
Tableau 9	Composition chimique de l'HE du Rosmarinus officinalis (chemotype à á-pinène).		42
Tableau 10	Composition chimique de l'HE de Thymus vulgaris.		43
Tableau 11	Gîtes larvaires prospectés au niveau de la ville de Fès.		44
Tableau 12	Mortalité (%) des larves de Culex pipiens en fonction de la concentration des extraits aqueux (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition.		46
Tableau 13	Mortalité (%) des larves de Culex pipiens en fonction de la concentration des extraits aqueux (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition.		47
Tableau 14	Moyenne de Mortalité (%) des larves de Culex pipiens de 2 répétitions en fonction de la concentration des extraits aqueux (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition.		48
Tableau 15	Mortalité (%) des larves de Culex pipiens en fonction de la concentration des huiles essentielles (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition.		50
Tableau 16	Mortalité (%) des larves d'Anopheles labranchiae en fonction de la concentration d'huile essentielle (%) d'Eucalyptus camaldulensis L. après 24 heures d'exposition.		53
Tableau 17	Concentrations létales CL50 et CL95 (24 h) des huiles essentielles de 6 espèces végétales à l'égard des larves de Culex pipiens.		54
Tableau 18	Mortalité (%) des larves de culex pipiens en fonction de la concentration d'insecticides (mg/l) du Téméphos et Malathion après 24 heures d'exposition.		55
Tableau 19	Concentrations létales CL50 et CL95 (24 h) des insecticides à l'égard des larves de Culex pipiens.		56
Tableau 20	Conditions de température et d'humidité Relative durant la réalisation des tests.		56

Liste des figures

Chapitre I : Synthèse bibliographique		Pages
Figure 1	Mortalité attribuée aux maladies à transmission vectorielle (OMS, 2004).		4
Figure 2	Evolution du nombre des maladies parasitaires (DELM 2007).		5
Figure 3	Cycle de développement du Moustique.		7
Figure 4	Différences entre Anopheles et Culex (OMS, 2003).		9
Figure 5	Structure chimique du DDT.		13
Figure 6	Structure chimique du malathion.		14
Figure 7	Structure chimique du Parathion.		14
Figure 8	Structure chimique du Temephos.		14
Figure 9	Structure chimique de l'acide carbamique.		15
Figure 10	Structure chimique de la perméthrine.		16
Figure 11	Structure chimique de la deltaméthrine.		16
Figure 12	Structure chimique du lambdacyalothrine.		16
Figure 13	Structure chimique de la Cyperméthrine.		17
Figure 14	Structure chimique de la cyfluthrine.		17
Chapitre II : Matériel et méthode
Figure 15	Etuve à ventilation forcée.		27
Figure 16	Broyeur à tamis intégré.		27
Figure 17	Hydrodistillation par Clevenger.		29
Figure 18	Tests de sensibilités réalisés sur les larves de moustiques.		34
Résultats et discussion
Figure 19	Gîte Ibn Al Baytar.		45
Figure 20	Gîte Charia Fès-Sais		45
Figure 21	Pourcentages de mortalité suivant les extraits aqueux des 6 espèces végétales testés.		48
Figure 22	Effet larvicide des huiles essentielles (0,1%) de Rosmarinus officinalis, Eucalyptus camaldulensis et Salvia officinalis sur culex pipiens.		52
Figure 23	Effet larvicide des huiles essentielles (0 ,5 %) de Rosmarinus officinalis, Eucalyptus camaldulensis, Salvia officinalis, Thymus vulgaris, Artemisia absinthum et Origanum majorana sur culex pipiens.		52
Figure 24	Effet larvicide des huiles essentielles (2 %) de Rosmarinus officinalis, Eucalyptus camaldulensis,Thymus vulgaris et Artemisia absinthum sur culex pipiens.		53
Figure 25	Effet larvicide du Téméphos et du Malathion sur les larves de culex pipiens après 24 heures d'exposition.		55
Figure 26	Conditions de température et d'humidité relative.		57

INTRODUCTION générale

En dehors de leur nuisance, les moustiques causent aussi des maladies vectorielles. Les principaux genres de moustique sont :

Anopheles, Aedes, Culex et Mansonia. Dans les pays en développement, les maladies vectorielles les plus fréquentes sont le paludisme (malaria) et la fièvre jaune. Le moustique Culex quinquefasciatus est le principal vecteur de la Filariose de Bancroft et de maladies virales comme les encéphalites.

Au Maroc, le paludisme autochtone est dû au parasite Plasmodium vivax qui est le principal vecteur signalé au Maroc depuis 1949 par Boyd (Guy, 1976) et le responsable de la transmission est l'Anopheles labranchiae.

Les études pratiques et statistiques, menées au laboratoire Régional de Diagnostic Epidémiologique et d'Hygiène de Milieu de la Direction Régionale de la Santé à Fès , ont montré que les espèces du genre culex et du genre Aedes sont retrouvées durant toute l'année et que l'espèce Anopheles (Anopheles) labranchiae Fallerouni, 1926, vecteur responsable du paludisme autochtone éliminé en 2004, est présente également chaque année, d'autres espèces ont été trouvées telles que Anopheles (Anopheles) claviger Meigen, 1804 ; Anopheles (Anopheles) algeriensis Theobald, 1903 ; Anopheles (Cellia) cinereus Theobald, 1901 et Anopheles (Cellia) sergenti Theobald, 1907.

La présence de ces espèces constitue une menace réelle pour la région de Fès Boulemane qui a comme particularité l'association d'un certains nombre de facteurs de risque notamment:

- un régime annuel de précipitation constitué de deux périodes distinctes ; une pluvieuse du mois d'octobre au mois d'avril et une autre sèche du mois de juin au mois de septembre (EL Bouhali, 2001),

- le mouvement de la population de et vers les zones avoisinantes, jadis considérées comme vastes zones du paludisme hyper endémique (Zone du littoral atlantique Nord, grandes plaines de Gharb et du Sais) (province de taounat-El Houcima, de khmissat et celle de Ouazzan) (Faraj , 2008),

- la présence dans cette région des ressortissants de nombreux pays d'Afrique sub-saharienne touchés par le paludisme et l'existence de risque de l'implantation de cas importés (El Ouali Lalami et al., 2009).

C'est dans le cadre de la lutte contre les vecteurs de ces maladies parasitaires que des quantités très importantes de larvicides sous forme de produits chimiques de synthèse sont utilisées pour lutter contre les larves du moustique.

Cependant, en dehors de leur toxicité, certains produits chimiques utilisés dans cette lutte sont devenus moins efficaces du fait de la résistance développée par certains moustiques (OMS ,1999).

Les scientifiques tentent alors de trouver d'autres produits accessibles, moins toxiques (produits naturels surtout qui sont connu sous le nom de bio- insecticides) pour mener cette lutte.

Par ailleurs, la comparaison des produits naturels avec les produits chimiques de synthèse permettrait de mieux valoriser ces bio-insecticides naturels, même si l'utilisation de produits naturels n'est sans risques.

C'est dans ce cadre que s'inscrit notre travail qui a pour but évaluer l'activité larvicide des extraits aqueux de plantes et des huiles essentielles en comparaison avec les insecticides utilisés pour la lutte contre les larves du moustiques vecteurs de maladies parasitaires.

Chapitre I :

Généralités sur l'utilisation des plantes dans la lutte contre les vecteurs de maladies parasitaires

I- Les maladies à transmission vectorielle (MTV) :

Les maladies à transmission vectorielle (Tableau 1) maladies pour lesquelles l'agent pathogène (virus, bactérie ou parasite) est transmis d'un individu infecté (un hôte vertébré : homme ou animal) à un autre par l'intermédiaire d'un arthropode (insecte, tique) hématophage. Ces maladies, notamment les maladies humaines comme le paludisme ou la dengue, contribuent de façon majeure à l'impact global des maladies dans le monde (Figure1) (OMS, 2004). La production animale est également souvent sérieusement affectée par des maladies vectorielles comme la trypanosomose animale, la fièvre de la vallée du Rift ou la fièvre catarrhale du mouton (OIE, 2003).

Ces maladies ont ainsi des effets non seulement sur la santé mais également sur le développement socio-économique des pays touchés.

D'autre part, aujourd'hui, nombre de maladies émergentes du fait notamment des changements écologiques tels le réchauffement climatique et la modification des écosystèmes, sont des maladies à transmission vectorielle. En effet, ces maladies sont particulièrement sensibles aux changements écologiques susceptibles de modifier l'aire de répartition de certains pathogènes et/ou vecteurs et de favoriser la propagation de la maladie. C'est le cas, par exemple, de l'émergence récente de la fièvre catarrhale ovine dans le bassin méditerranéen (Purse et al., 2005) ou de la fièvre du Nil occidental aux Etats-Unis (Glaser, 2004).

Ainsi, le contrôle des maladies vectorielles constitue aujourd'hui un enjeu majeur. Ce contrôle passe par la compréhension des mécanismes de transmission de la maladie, qui sont généralement complexes du fait du mode de transmission indirect des maladies à transmission vectorielle faisant intervenir de nombreux acteurs : plusieurs vecteurs impliqués dans le cycle de transmission, éventuellement plusieurs hôtes, ou la présence d'un réservoir (population, vertébrée ou invertébrée), assurant le maintien de l'agent infectieux dans la nature (Rodhain et al., 1985).

Tableau 1 : Maladies transmises par des moustiques et autres diptères piqueurs (OMS, 1999).

Figure 1. Mortalité attribuée aux maladies à transmission vectorielle (OMS, 2004).

Au Maroc, la charge de morbidité due aux maladies transmissibles reste relativement élevée et celle liée aux maladies transmises par vecteurs (MTV) en constitue une part non négligeable. Si certaines parmi ces dernières sont éliminés telle que le paludisme et la bilharziose, l'incidence des leishmanioses demeure par contre relativement importante (Azizi et Laaziri, 2006).

II-Les vecteurs

Le vecteur est par définition un arthropode hématophage qui, à l'occasion de relations écologiques, acquiert un agent pathogène et assure, par son comportement, la transmission biologique active (ou mécanique) de l'agent pathogène d'un hôte vertébré à un autre (Rodhain , 1985). Parmi les 14600 espèces d'arthropodes hématophages effectuant plus ou moins régulièrement des repas de sang sur des vertébrés, y compris l'homme, seulement 2 à 3 % seraient des vecteurs de maladies de l'espèce humaine ou d'animaux domestiques (Ribeiro, 1995).

Les vecteurs interviennent de manière indispensable dans le cycle des pathogènes. La distribution des maladies à transmission vectorielle est ainsi restreinte à la distribution spatiale des vecteurs et des hôtes (Kitron, 1998).

1. Le moustique

Les moustiques se distinguent des autres insectes piqueurs par leur long corps grêle, leurs longues pattes et leurs pièces buccales en forme d'aiguilles. On peut quelquefois discerner une apparence d'écaillés au niveau des ailes. Les imagos (insectes adultes) ont entre 2 et 12,5 mm de longueur (OMS, 1999).

1.1 Cycle de développement du moustique :

Le cycle de développement des moustiques dure environ douze à vingt jours (Adisso et Alia, 2005) et comprend quatre stades: l'oeuf, la larve, la nymphe (pupe) et l'adulte. Cette métamorphose se déroule en deux phases à savoir:

Les adultes mâles et femelles se nourrissent de jus sucrés, de nectars et d'autres secrétions végétales. Pourtant, une fois fécondées, les femelles partent en quête d'un repas sanguin duquel, elles retirent les protéines et leurs acides aminés, nécessaires pour la maturation des oeufs. Ce repas sanguin prélevé sur un vertébré (mammifère, amphibien, oiseau), est ensuite digéré dans un endroit abrité (Guillaumot, 2006).

Dès que la femelle est gravide, elle se met en quête d'un gîte de ponte adéquat pour le développement de ses larves. La ponte a lieu généralement au crépuscule. Le gîte larvaire est une eau stagnante ou à faible courant, douce ou salée (Ayitchedji, 1990). Selon Iroko (1994), le sang, l'eau et une température d'au moins 18 °C sont les trois conditions nécessaires, pour la reproduction et le développement de certains moustiques d'Afrique du sud.

Le cycle de développement du moustique est schématiquement représenté par la figure 3

Quelques jours après la fécondation, suivant les espèces, les oeufs de diverses formes (fusiformes, allongés, renflés dans leur milieu et parfois munis de minuscules flotteurs latéraux) sont pondus par la femelle dans différents milieux. La ponte est souvent de l'ordre de 100 à 400 oeufs et le stade ovulaire dure deux à trois jours dans les conditions de: température du milieu, pH de l'eau, nature et abondance de la végétation aquatique de même que la faune associée. La taille d'un oeuf est d'environ 0,5 mm (Rodhain et Perez, 1985).

A maturité, les oeufs s'éclosent et donnent des larves de stade 1 (1 à 2 mm) qui, jusqu'au stade 4 (1,5 cm) se nourrissent de matières organiques, de microorganismes et même des proies vivantes (pour les espèces carnassières). Malgré leur évolution aquatique, les larves de moustiques ont une respiration aérienne qui se fait à l'aide de stigmates respiratoires ou d'un siphon. La larve stade 4 est bien visible à l'oeil nu par sa taille. Elle a une tête, qui porte latéralement les taches oculaires et les deux antennes. Viennent ensuite le thorax et l'abdomen.

Au bout de six à dix jours et plus, selon la température de l'eau et la disponibilité en nourriture, la quatrième mue donne naissance à une nymphe: c'est la nymphose (Guillaumot, 2006). Généralement sous forme de virgule ou d'un point d'interrogation, la nymphe, mobile, ne se nourrit pas durant tout le stade nymphal (phase de métamorphose) qui dure un à cinq jours. Elle remonte de temps à autre à la surface de l'eau pour respirer et plonge vers le fond, dès qu'elle est dérangée.

A la fin de ce stade, la nymphe s'étire, son tégument se fend dorsalement et, très lentement, le moustique adulte (imago) s'extirpe de l'exuvie : c'est l'émergence, qui dure environ quinze minutes au cours desquelles l'insecte se trouve exposé sans défense face à de nombreux prédateurs de surface (Rodhain et Perez, 1985).

1.2 Classification des moustiques

La classification des espèces de la famille des culicidae est représentée dans le tableau 2 :

1.3 Caractères distinctifs des genres anophélinae et culicinae :

Les moustiques sont morphologiquement différents les uns des autres. Il existe des différences entre les deux sous-familles Anophelinae et Culicinae, qui portent sur les oeufs, les larves, les nymphes, les palpes maxillaires, les antennes et la position au repos (Figure 5).

- Les larves des Anophelinae respirent par des spiracles dorsaux, ce qui leur impose la position parallèle à la surface de l'eau, tandis que celles de Culicinae respirent par le siphon et ont de ce fait, une position oblique à la surface de l'eau.

Culex pipiens est le moustique le plus fréquent dans le monde. C'est un moustique ubiquiste capable de s'adapter à différents biotopes ; il se développe aussi bien dans les milieux urbains que ruraux, dans les eaux polluées que propres. Dans plusieurs régions, il est actif pendant toute l'année et atteint son maximum de développement pendant les saisons chaudes.

Ses préférences trophiques sont très variables car il est plutôt ornithophile, mais il s'attaque volontiers aux humains et aux mammifères lorsqu'ils cohabitent (Savage et Miller, 1995). Cx pipiens est connu comme étant vecteur de plusieurs maladies notamment des arboviroses. Savage et al. le considèrent comme l'un des principaux vecteurs du virus de l'encéphalite de Saint-Louis (SLE) aux États-Unis. Il a été considéré aussi comme le principal responsable de l'épidémie du virus West Nile qui a frappé les États-Unis en 2002 (Palmisano et al., 2005).

Au Maroc, Cx pipiens joue un grand rôle dans la forte nuisance que connaît la majorité des zones urbaines. Son rôle dans la transmission des épidémies du virus West Nile qui ont touché le Maroc en 1996 (Harrack et al., 1997 ; Murgue et al., 2001) et en 2003 (Schuffenecker et al .,2005) est fortement suspecté sa forte densité qui coïncide dans le temps et dans l'espace avec la date de dépistage des cas équins fait de lui le vecteur le plus probable (INH, 2002). De ce fait, il est primordial de connaître sa compétence et sa capacité vectorielles dans les conditions marocaines (Detinova, 1963).

C'est le principal vecteur de paludisme dans la région méditerranéenne et au Maroc.

Cette espèce occupe parmi les culicidés méditerranéens une place prépondérante, due à sa fréquence et à son importance dans la transmission du paludisme .Elle est limitée à la partie occidentale du bassin méditerranéen.

C'est le seul représentant des maculipennis en Afrique du nord, Europe, Espagne, Italie, Corse, Sardaigne, Sicile...

Au Maroc, c'est un moustique très ubiquiste qu'on retrouve sur les plaines littorale méditerranéennes et atlantiques, jusqu'au sud d'Agadir. Son aire de distribution continentale recouvre pratiquement tout le territoire, englobant les chaines de montagne du Rif et du Moyen Atlas. Sa limite sud pourrait être représentée par le versant du Haut Atlas. Il constitue l'espèce dominante dans le nord ouest du pays et représente le seul peuplement anophélien dans la plaine du Rharb (Himmi, 2007).

III- La lutte contre les maladies à transmission vectorielle

La lutte contre les maladies à transmission vectorielle nécessite une approche intégrée dirigée à la fois contre les pathogènes et contre les vecteurs. Aujourd'hui deux méthodes complémentaires de lutte sont développées :

1 - la réduction de la charge parasitaire à travers le dépistage et/ou le diagnostic afin de mettre en place un traitement adapté chez les personnes infectées.

2 - la réduction des populations de vecteur et du contact homme-vecteur à travers la lutte anti-vectorielle (Poinsignon, 2008).

1. Lutte anti-larvaire

La lutte anti-larvaire a été très utilisée avant l'arrivée massive des adulticides. Cette lutte empêche le développement des larves en stade mature par la destruction des gîtes larvaires ou par l'emploi de méthodes aboutissant au blocage du développement des larves.

Diverses techniques sont employées allant des plus rudimentaires aux plus sophistiquées : assainissement de l'environnement, recours à des prédateurs larvicides (Fillinger et al. 2003).

Ces diverses méthodes sont toujours utilisées (OMS, 2006). L'application de ces techniques sur des surfaces étendues a donné des résultats très encourageants (éradication des populations d'Anopheles au Brésil et en Egypte) (OMS , 2006).

1.1 Les différents moyens de lutte antivectorielle

L'objectif principal de la lutte antivectorielle est la diminution de la morbidité et de la mortalité palustre grâce à l'abaissement du taux d'inoculation entomologique. L'inoculation nécessitant la présence du vecteur infecté, les méthodes actuelles visent principalement la réduction du contact homme vecteur, la densité du vecteur et la durée de vie du vecteur adulte (OMS, 2004a).

L'action contre les larves de moustiques par des agents naturels consiste à détruire les larves ou à empêcher leur développement par l'utilisation de forces naturelles animées ou inanimées (OMS, 1974).

La lutte biologique consiste à introduire, dans le biotope des moustiques, des espèces qui sont leurs ennemis, tels que microorganismes ou prédateurs naturels des larves de moustiques ; les moyens les plus répandus sont les larvicides biologiques et les poissons larvivores.

Par l'expression très générale d'action physique on entend toute modification intentionnelle du milieu qui vise soit à faire disparaitre ou réduire par des moyens physique les nappes d'eau de surface dans lesquelles les moustiques se développent, soit à provoquer des modifications physique du milieu qui rendent l'eau impropre à la reproduction des moustiques.

L'action physique consiste généralement à entreprendre des travaux de régularisation du régime des eaux, d'aménagement de l'écoulement ou de modification physique par d'autres moyens (OMS ,1974).

La lutte chimique consiste à l'utilisation de produits chimique de synthèse pour lutter contre les larves et les imagos de moustiques.

Les composés utilisés au début contre les organismes nuisibles étaient des pesticides de première génération relativement simple à base d'arsenic, de soufre, de chaux, de dérivés du pétrole, de substance à base de fluor ou extraite de plantes comme la nicotine. Ces pesticides se caractérisent par leur toxicité relativement élevée pour les organismes non visés et surtout leur rémanence ou encore leur lente décomposition dans l'environnement (Philogene, 1991).

Par la suite des composés synthétiques dits de deuxième génération ont été mis en place, il s'agit des organochlorés, des organophosphorés et des carbamates (Philogene, 1991). Ces dits pesticides de deuxième génération et les pyréthrinoïdes sont encore utilisés de nos jours en agriculture et dans la lutte antivectorielle.

1.2 Les classes d'insecticides utilisés dans la lutte antivectorielle.

Le dichloro-diphényl-trichloréthane (DDT) (fig.5) est un composé qui présente une grande solubilité dans les solvants organiques, les graisses et le pétrole.

La combinaison de ses trois propriétés (répulsivité, irritabilité et toxicité) vis-à-vis des moustiques lui a valu sa place dans les programmes de lutte contre le paludisme. L'OMS ne recommande son usage que pour la lutte antivectorielle et sous la forme de pulvérisations intra domiciliaires à effet rémanent (appliquées uniquement sur les murs intérieurs des habitations) (OMS, 2004b).

Le DDT agit en perturbant l'ouverture des canaux sodium le long de l'axone chez l'insecte qui meurt après hyperexcitation, convulsions et paralysie.

Les organophosphorés agissent en inhibant l'acétylcholinestérase, provoquant ainsi l'accumulation d'acétylcholine et le blocage de la transmission de l'influx nerveux.

- les insecticides exothérapiques: le malathion (fig.6), le parathion (fig.7) et le temephos (fig.8), ils pénètrent directement dans l'organisme des insectes par des voies diverses.

- les insecticides endothérapiques ou systémiques qui ont la propriété de pénétrer dans les végétaux et d'être transportés par la sève. Ces insecticides subissent quelques fois des transformations chimiques, mais restent toxiques pour les insectes qui consomment ces végétaux. La forme oxydée de ces pesticides a la faculté de se fixer sur l'acétylcholinestérase.

Ce sont également des inhibiteurs de l'acétylcholinestérase. Ils sont considérés comme des insecticides de circonstances spéciales ou seulement utilisés dans les cas où l'utilisation des autres insecticides se heurte à un échec (Diabaté, 1999). Le propoxur est le plus utilisé de ce groupe.

Selon leur origine, ils ont été classés en pyréthrinoïdes naturelles ou insecticides botaniques extraites des plantes (Solanaceae, Compositaceae) et en pyréthrinoïdes synthétiques (carboxylester).

Ils pénètrent facilement la cuticule des insectes et interviennent au niveau du système nerveux de l'insecte pour perturber l'action du neurotransmetteur GABA.

Ils ont également pour cible le canal sodium voltage dépendant constitué par quatre domaines (I-IV) et six domaines transmembranaires. Leur action à ce niveau contribue aussi à perturber le signal nerveux (Hemingway et al., 2004). Les pyréthrinoïdes sont largement utilisés dans l'agriculture (Chandre et al., 1999; Diabaté et al., 2004) et dans l'imprégnation des moustiquaires à cause de leur effet irritant marqué sur les moustiques (Chandre et al., 1999). Les plus utilisés sont : la pennéthrine (fig.10), la deltaméthrine (fig.11), la lambdacyalothrine (fig.12), la cypennéthrine (fig.l3) et la cytluthrine (fig.14). Parmi ces insecticides, l'alpha-cyperméthrine confère une efficacité maximale aux moustiquaires imprégnées contre An. gambiae (Hougard, 2003).

1.3 Pollution et insecticides

La présence de pesticides dans l'environnement pose problème, pour la santé humaine et pour l'équilibre des écosystèmes. Lorsqu'on en trouve dans l'eau de consommation humaine, les risques sont particulièrement élevés ; de même pour les écosystèmes aquatiques, très sensibles aux pesticides, qui peuvent se concentrer dans la chaîne trophique. De plus, les utilisations de pesticides elles-mêmes impliquent aussi des risques sanitaires pour les utilisateurs et les personnes amenées à fréquenter les surfaces traitées, ce qui est courant pour les utilisations non agricoles (boulet, 2005).

Car libérés dans l'environnement, les pesticides vont évidemment éliminer les organismes contre lesquels ils sont utilisés. Mais, la plupart de ces produits vont également toucher d'autres organismes que ceux visés au départ, de manière directe (absorption, ingestion, respiration, etc.) ou indirecte (via un autre organisme contaminé, de l' eau pollué, etc.). Les effets sur la biodiversité, et notamment la flore et la faune terrestres et aquatiques, sont donc indéniables.

Plusieurs phénomènes peuvent en effet accroître l'impact des pesticides sur la faune et la flore sauvages. Parmi ceux-ci, retenons notamment :

- la dispersion des produits : lors du traitement d'une culture par des pesticides, une proportion non négligeable de produit est disséminée dans l'environnement, au-delà des zones traitées ;

- la non sélectivité : rares sont les pesticides qui ont un effet sélectif, c'est-à-dire ciblé sur une seule espèce ou un groupe d'espèces, car ils interviennent sur des processus fondamentaux du métabolisme (photosynthèse, croissance, reproduction, etc.) communs aux espèces visés et aux autres espèces ;

- la toxicité de la molécule active et de ses produits de dégradation : elle est variable d'un groupe d'espèces à un autre ;

- la rémanence de la molécule et sa capacité d'accumulation dans la chaîne alimentaire : certains pesticides comme les organochlorés (le DDT ou le lindane par exemple) sont peu ou pas dégradés dans le sol et les milieux contaminés (eau, etc.). De ce fait, ces pesticides vont s'accumuler dans les plantes, voire dans les graisses animales, et donc de se concentrer tout au long de la chaîne alimentaire.

Iv- les plantes

L'histoire des plantes aromatiques et médicinales est associée à l'évolution des civilisations. Dans toutes les régions du monde, l'histoire des peuples montre que ces plantes ont toujours occupé une place importante en médecine, dans la composition des parfums et dans les préparations culinaires.

La valorisation de ces ressources naturelles végétales passe essentiellement par l'extraction de leurs huiles essentielles. Ces dernières sont des produits à forte valeur ajoutée, utilisées dans les industries pharmaceutiques, cosmétiques et agroalimentaires. L'étude des activités biologiques et biotechnologique des extraits de plantes est d'un grand intérêt. Les activités antimicrobiennes des huiles essentielles ont été rapportées dans plusieurs travaux (Janssen et al., 1987 ; Bouzouita et al., 2005).

Dans la plupart des cas ces activités sont attribuées aux monoterpènes oxygénés (Carson et al., 1995). D'autre part nous savons que la conservation des denrées entreposées est généralement assurée par des insecticides de synthèse qui peuvent être le moyen le plus efficace et le moins coûteux pour contrôler les insectes. Cependant l'utilisation abusive des insecticides chimiques a des effets négatifs. Des travaux sont effectués dans ce contexte et ont montré une efficacité des extraits des plantes (Guarrera, 1999). En effet les plantes constituent une source de substances naturelles qui présente un grand potentiel d'application contre les insectes et d'autres parasites des plantes et du monde animal.

1-Les huiles essentielles

1-1 Généralités

1-1-2 Définition

Le terme « Huiles essentielles » est un terme générique qui désigne les composants liquides et hautement volatiles des plantes, marqués par une forte et caractéristique odeur. Les terpènes (principalement les monoterpènes) représentent la majeure partie (environ 90%) de ces composants.

Les huiles essentielles sont par définition des métabolites secondaires produits par les plantes comme moyen de défense contre les ravageurs phytophages. Ces extraits contiennent en moyenne 20 à 60 composés qui sont pour la plupart des molécules peu complexes (monoterpènes, sesquiterpènes,...).

Il est admis que l'effet de ces composés purs peut être différent de celui obtenu par des extraits de plantes.

Les huiles essentielles contiennent un nombre considérable de familles biochimiques (chémotypes) incluant les alcools, les phénols, les esters, les oxydes, les coumarines, les sesquiterpènes, les terpénols, les cétones, les aldéhydes, etc. On voit qu'elles ne sont pas constituées d'acides gras, ni d'aucun autre corps gras.

Elles sont obtenues par expression (réservée aux agrumes) ou par distillation à la vapeur d'eau. Elles sont volatiles, solubles dans l'alcool et dans l'huile, mais pas dans l'eau. Ce sont des substances odorantes.

1-2 Histoire de leur utilisation

Reconnues pour leurs puissantes propriétés thérapeutiques et utilisées depuis des millénaires en Chine, en Inde, au Moyen Orient, en Egypte, en Grèce, en Amérique Latine (Aztèques, Mayas, Incas) et en Afrique, les huiles essentielles tombent dans l'oubli au Moyen Age. A ce moment, l'Europe connaît un retour à la barbarie avec un déclin général du savoir. Il faudra attendre l'arrivée des Arabes pour assister à un nouvel essor de la médecine par les plantes qui retrouvent alors une place de choix dans l'arsenal thérapeutique de l'époque.

L'utilisation des extraits de plantes comme insecticides est connue depuis longtemps. Dans certaines régions d'Afrique noire, les feuilles de tabac malaxées dans l'eau étaient utilisées pour lutter contre les moustiques. Au Maroc, l'utilisation de plantes contre les invasions de moustiques est une pratique très courante, surtout dans les régions rurales.

1-3 Activité insecticide : mécanismes d'action

Les huiles essentielles représentent une piste d'avenir et les recherches sur les extraits d'huiles sont nombreuses : le tableau de Mohan et Ramaswamy, 2007 (annexe 1) récapitule les différentes études et les différents résultats.

Toutefois, la grande majorité de ces études portaient sur les moustiques, que ce soit sur l'effet répulsif des huiles essentielles ou sur leur effet larvicide (Ntonifor et al, 2006).

Le mode d'action des huiles essentielles est relativement peu connu chez les insectes (Bekele et Hassanali, 2001) (Isman, 2000).

2. Extraction des huiles essentielles

Il existe plusieurs méthodes pour extraire les huiles essentielles. Les principales sont basées sur l'entraînement à la vapeur, l'expression, la solubilité et la volatilité. Le choix de la méthode la mieux adaptée se fait en fonction de la nature de la matière végétale à traiter, des caractéristiques physico-chimiques de l'essence à extraire, de l'usage de l'extrait et l'arôme du départ au cours de l'extraction (Samate, 2001).

2.1. Principales méthodes d'extraction

2.1.1. L'entraînement à la vapeur d'eau

Les méthodes d'extraction par l'entraînement à la vapeur d'eau sont basées sur le fait que la plupart des composés volatils contenus dans les végétaux sont entraînables par la vapeur d'eau, du fait de leur point d'ébullition relativement bas et de leur caractère hydrophobe. Sous l'action de la vapeur d'eau introduite ou formée dans l'extracteur, l'essence se libère du tissu végétal et entraînée par la vapeur d'eau. Le mélange de vapeurs est condensé sur une surface froide et l'huile essentielle se sépare par décantation (Bruneton, 1993).

- au niveau supérieur du distillat, si elle est plus légère que l'eau, ce qui est fréquent ;

Les principales variantes de l'extraction par l'entraînement à la vapeur d'eau sont l'hydrodistillation, la distillation à vapeur saturée et l'hydrodiffusion.

2.1.2. L'hydrodistillation

Le principe de l'hydrodistillation est celui de la distillation des mélanges binaires non miscibles. Elle consiste à immerger la biomasse végétale dans un alambic rempli d'eau, que l'on porte ensuite à l'ébullition. La vapeur d'eau et l'essence libérée par le matériel végétal forment un mélange non miscible. Les composants d'un tel mélange se comportent comme si chacun était tout seul à la température du mélange, c'est à dire que la pression partielle de la vapeur d'un composant est égale à la pression de vapeur du corps pur.

Cette méthode est simple dans son principe et ne nécessite pas un appareillage coûteux. Cependant, à cause de l'eau, de l'acidité, de la température du milieu, il peut se produire des réactions d'hydrolyse, de réarrangement, de racémisation, d'oxydation, d'isomérisation, etc. qui peuvent très sensiblement conduire à une dénaturation.

2.1.3. La distillation à vapeur saturée

Dans cette variante, la matière végétale n'est pas en contact avec l'eau. La vapeur d'eau est injectée au travers de la masse végétale disposée sur des plaques perforées. La distillation à vapeur saturée est la méthode la plus utilisée à l'heure actuelle dans l'industrie pour l'obtention des huiles essentielles à partir de plantes aromatiques ou médicinales. En général, elle est pratiquée à la pression atmosphérique ou à son voisinage et à 100°C, température d'ébullition d'eau. Son avantage est que les altérations de l'huile essentielle recueillie sont minimisées.

2.1.4. L'hydrodiffusion

Elle consiste à pulser de la vapeur d'eau à travers la masse végétale, du haut vers le bas. Ainsi le flux de vapeur traversant la biomasse végétale est descendant contrairement aux techniques classiques de distillation dont le flux de vapeur est ascendant. L'avantage de cette technique est traduit par l'amélioration qualitative et quantitative de l'huile récoltée, l'économie du temps, de vapeur et d'énergie.

2.1.5. L'expression à froid

L'extraction par expression est souvent utilisée pour extraire les huiles essentielles des agrumes comme le citron, l'orange, la mandarine, etc. Son principe consiste à rompre mécaniquement les poches à essences. L'huile essentielle est séparée par décantation ou centrifugation. D'autres machines rompent les poches par dépression et recueillent directement l'huile essentielle, ce qui évite les dégradations liées à l'action de l'eau.

2.2. Autres méthodes d'obtention des extraits volatils

2.2.1. Extraction par solvants

La méthode de cette extraction est basée sur le fait que les essences aromatiques sont solubles dans la plupart des solvants organiques. L'extraction se fait dans des extracteurs de construction variée, en continu, semi-continu ou en discontinu.

Le procédé consiste à épuiser le matériel végétal par un solvant à bas point d'ébullition qui par la suite, sera éliminé par distillation sous pression réduite.

L'évaporation du solvant donne un mélange odorant de consistance pâteuse dont l'huile est extraite par l'alcool. L'extraction par les solvants est très coûteuse à cause du prix de l'équipement et de la grande consommation des solvants. Un autre désavantage de cette extraction par les solvants est leur manque de sélectivité; de ce fait, de nombreuses substances lipophiles (huiles fixes, phospholipides, caroténoïdes, cires, coumarines, etc.) peuvent se retrouver dans le mélange pâteux et imposer une purification ultérieure (Brian, 1995).

2.2.2. Extraction par les corps gras

La méthode d'extraction par les corps gras est utilisée en fleurage dans le traitement des parties fragiles de plantes telles que les fleurs, qui sont très sensibles à l'action de la température. Elle met à profit la liposolubilité des composants odorants des végétaux dans les corps gras. Le principe consiste à mettre les fleurs en contact d'un corps gras pour le saturer en essence végétale. Le produit obtenu est une pommade florale qui est ensuite épuisée par un solvant qu'on élimine sous pression réduite. Dans cette technique, on peut distinguer l'enfleurage où la saturation se fait par diffusion à la température ambiante des arômes vers le corps gras et la digestion qui se pratique à chaud, par immersion des organes végétaux dans le corps gras (Brian, 1995).

Sous l'effet conjugué du chauffage sélectif des micro-ondes et de la pression réduite de façon séquentielle dans l'enceinte de l'extraction, l'eau de constitution de la matière végétale fraîche entre brutalement en ébullition. Le contenu des cellules est donc plus aisément transféré vers l'extérieur du tissu biologique, et l'essence est alors mise en oeuvre par la condensation, le refroidissement des vapeurs et puis la décantation des condensats. Cette technique présente les avantages suivants: rapidité, économie du temps d'énergie et d'eau, extrait dépourvu de solvant résiduel (Mompon, 1994 ; Brian, 1995).

3. Préparations des extraits aqueux :

Les trois préparations élémentaires sont l'infusion, la décoction et la macération.

3.1. Infusion :

Elle consiste à verser de l'eau bouillante sur les plantes (ou encore à jeter les plantes dans le récipient contenant l'eau bouillante) au moment précis où l'eau entre en ébullition. On couvre le récipient et on laisse infuser le temps nécessaire. Le temps d'infusion est variable suivant la nature de la plante : de dix minutes à une heure ; il va de soi que celle des plantes à tissus plus épais (racines, tiges). C'est par l'infusion que sont traitées les plantes médicinales les plus couramment utilisées : Camomille, Menthe, Thé, Tilleul, Verveine etc.

Cette préparation s'opère en faisant bouillir les plantes, le plus souvent dans de l'eau, parfois dans du vin (alcool). Elle convient surtout aux écorces, aux racines, tiges et fruits. On laisse bouillir pendant un temps plus ou moins long selon les espèces, en général de 10 à 30 minutes. Pour extraire le plus possible de principes actifs, il faut avoir soin de couper les plantes en menus morceaux, puis de passer la tisane en exprimant.

Par exemple, c'est par la décoction que sont traités les racines de Patience et de Chicorée, les feuilles et les fruits d'Epine-vinette, l'écorce de Bouleau, la tige de Douce-amère.

Très simple, cette préparation s'obtient en mettant les plantes en contact, à froid, avec un liquide quelconque. Ce liquide peut être du vin (vin de Gentiane), de l'alcool (alcoolature d'Ail, teinture de Boldo), de l'huile (huile de Serpolet). Le temps de contact est parfois très long. Les macérations à l'eau, plus rarement employées, car elles ont l'inconvénient de fermenter facilement, ne doivent pas, de toute manière, excéder une dizaine d'heures (Gildemeister et Hoffmann, 1919).

Chapitre II :

Matériel et méthodes

Nous nous sommes proposés d'étudier l'activité larvicide des extraits aqueux de plantes et des huiles essentielles sur les larves de moustiques vecteurs de maladies parasitaires issues de différents gîtes surveillés de la ville de Fès.

La première partie concernant l'extraction des huiles essentielles et l'obtention de la poudre à partir des plantes, s'est déroulée au niveau du Laboratoire de Valorisation et Application Industrielle de l'Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques de TAOUNAT(INPMA).

La deuxième partie concerne l'activité larvicide en la comparant aux insecticides utilisés par les services du Ministère de la Santé est réalisée à l'Unité d'Entomologie du Paludisme du Laboratoire Régional de Diagnostic Epidémiologique et d'Hygiène du Milieu (LRDEHM).

Ce laboratoire est situé à l'Hôpital EL GHASSANI de Fès, disposant d'une Unité d'Entomologie chargé de l'identification de moustiques et du suivi de la sensibilité OMS des insectes aux pesticides. Il est la seule entité du Ministère de la Santé opérant sur l'identification et la surveillance des vecteurs culicidés et leurs tests de sensibilité vis-à-vis des insecticides au niveau de la région Fès-Boulemane.

- Une observation de l'effet répulsif des plantes dans leur environnement naturel vis-à-vis des insectes ;

Les spécimens ont été identi?és à l'Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques de Taounate, par le Dr. Abdeslam Ennabili sous les numéros d'herbiers respectifs d'INP 216 à INP 251.

Des échantillons de plantes ont été récoltés dans le jardin expérimental de l'Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques (INPMA) de Taounate. Ces échantillons ont été prélevés en mois de mars 2010.

La matière végétale (feuilles, tiges et bois) de 20 plantes locales (récoltées au niveau de l'Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques de Taounate), a été séchée dans une étuve à ventilation forcée portée à 40 °C pendant 24h à 48 h.

Les feuilles des espèces végétales ont été ensuite broyées à l'aide d'un broyeur muni d'un tamiseur intégré de diamètre Ö < 1mm, jusqu'à réduction en poudre.

5 g de poudre de plantes a été introduite dans une étuve portée à 60 °C pendant 48 h, Cela permet d'exprimer la teneur en eau.

Dans le but de donner une signi?cation plus logique aux quantités de matières végétales solubles dans les extraits aqueux, ces derniers ont été concentrés par évaporation dans une étuve portée à 40 °C pendant 48 h, jusqu'à l'obtention d'un résidu sec dont la quantité est exprimée en mg. Cela permet d'exprimer les concentrations létales des résidus secs solubles dans l'eau en mg/l.

Le matériel végétal est constitué de la partie aérienne des plantes choisies, des fractions d'environ 160 g à 200 g de feuilles de chaque plantes vont être soumises à une hydrodistillation pendant 3 h, grâce à un appareillage de type Clevenger modifié.

Les huiles essentielles recueillies par décantation à la ?n de la distillation vont être séchées sur du sulfate de sodium anhydre pour éliminer les traces d'eau résiduelles. L'essence ainsi obtenue va être mise dans des ?acons sombres, et le rendement d'extraction est calculé par rapport au poids du matériel végétal avant extraction.

Le rendement R en huile essentielle est calculé à l'aide de la formule suivante :

Un échantillon de chaque huile essentielle a été analysé pour déterminer la composition chimique par chromatographie en phase gazeuse couplé à la spectrométrie de masse (CG/MS).

La composition chimique de l'huile essentielle a été analysée par chromatographie en phase gazeuse couplé à la spectrométrie de masse (CG/MS) ; ce qui permet à la fois l'analyse chromatographique de chaque huile ainsi que la détermination qualitative et quantitative des composés majoritaires.

L'identification des constituants a été réalisée par couplage d'un chromatographe en phase gazeuse de marque PERKIN ELMER 8500 à un spectromètre de masse de type FINNIGAN ITD (Ion Trap Detector), modèle 800 enregistrant à 70 eV. La colonne capillaire 5% Phényl-Méthyl-Siloxane possède les caractéristiques suivantes : 30 m de longueur, 0.25 mm de diamètre interne, 0.25 ìm d'épaisseur du film).

Les conditions opératoires sont : température de l'injecteur splitless (250°C), programmation de température (de 40°C à 250°C, à raison de 6°C/min), gaz vecteur (He à 1 ml/min, vitesse linéaire moyenne = 36 cm/s), températures de la source et du quadripôle (230°C et 150°C respectivement), énergie d'ionisation (70 eV), gamme de masse (35 à 400 amu).

L'identification des différents constituants est réalisée à partir de leurs spectres de masse en comparaison avec ceux des composés standard de la banque de données informatisées WILEY 275.L (Adams, 2001). Pour les hydrocarbures terpéniques divers, les confirmations sont obtenues par comparaison des spectres de masse et de leurs indices de rétention selon Kovats, donnés par la littérature (Joulain et König, 1998 ; Adams, 2001).

La prospection des gîtes a pour but de recueillir des informations sur la présence ou l'absence des vecteurs potentiels de maladies parasitaires.

Il existe plus de 25 gîtes au niveau de la ville de Fès, nous avons effectué une sortie de prospection des gîtes pour choisir les gîtes à culex et ceux à anophèle.

La collecte des larves au niveau des gîtes larvaires a été effectuée par l'utilisation d'un plateau ou d'haricot, le plateau est introduit dans l'eau en inclinant son borde à 45° sous l'effet des forces de tension, la couche superficielle de l'eau est ainsi attirée ainsi que les spécimens qui y surnagent.

La conservation des larves a été faite au niveau du terrain, les larves récoltées sont mises dans des microtubes remplis au trois quart d'alcool à 70° (éthanol) à l'aide d'une pipette.

Au laboratoire, les larves de moustiques de stade 3 et 4 ont été mises entre lame et lamelle et déterminées sous microscope.

Un certain nombre de caractères morphologiques sont utilisés pour l'identification des larves. Dans notre étude, elles ont été déterminées à l'aide d'une clé d'identi?cation des culicidés du Maroc (Himmi, 1995).

Après réduction en poudre. Une quantité de 10 g de poudre de chaque plante a été diluée dans 100 millilitre d'eau distillée préalablement portée à ébullition, puis laissée refroidir sous agitation magnétique pendant 30 minutes. Le mélange obtenu a été ?ltré à l'aide du papier Whatman (125 MM). Le ?ltrat récupéré représente une solution stock initiale à 10 g par 100 ml soit 10 %.

3. À partir des huiles essentielles extraites, des solutions mères d'huiles essentielles de chaque échantillon ont été préparées dans l'éthanol à 95-96°, à partir desquelles des dilutions ont été réalisées dans l'eau de gîte pour obtenir des concentrations expérimentales ?nales prête à être tester.

La méthodologie de nos tests a été inspirée de la technique des tests de sensibilité normalisés par l'Organisation Mondiale de la Santé, adoptée pour tester la sensibilité des larves, vis-à-vis des insecticides utilisés en campagnes de lutte (OMS, 1963), (Aouinty et al.,2006).

Expérimentation 1: Détermination de l'effet larvicide de 6 extraits aqueux.

À partir de l'extrait initial (solution stock 10 %) de chaque plante et l'eau du gîte larvaire, des concentrations de 9 %, 8 %, 7 % , 6 % et 5 % ont été préparées.

10 larves du stade 3 et 4 ont été prélevées à l'aide d'une pipette pasteur et mises dans des gobelets de 5 cm du diamètre, contenant chacun 99 ml d'eau du gîte (par introduction d'un millilitre de chaque solution ainsi diluée dans les gobelets précédemment préparés). Le même nombre de larves a été placé dans un gobelet témoin contenant 100 ml d'eau du gîte. Trois répétitions ont été réalisées pour chaque dilution ainsi que pour le témoin.

Expérimentation 2: Détermination de l'effet larvicide de 6 huiles essentielles.

À partir des solutions mères d'huiles essentielles (solution stock 0,5 %) de chaque plante, des concentrations de 0,5 %, 0,4 %, 0,3 %, 0,2 % et 0,1 % ont été préparées. 10 larves de stade 3 et 4 ont été prélevées à l'aide d'une pipette pasteur et mises dans des gobelets du 5 cm de diamètre, contenant chacun 99 ml d'eau du gîte (par introduction d'un millilitre de chaque solution ainsi diluée dans les gobelets précédemment préparés, ce qui correspond dans tous les cas à une concentration en éthanol de 0,1 %). Trois répétitions ont été réalisées pour chaque dilution ainsi que pour le témoin.

Expérimentation 3: Comparaison entre l'action des extraits de plantes et des insecticides sur les larves des moustiques.

À partir des concentrations mères d'insecticide, des concentrations de 0,00125 mg/l, 0,0025 mg/l, 0,005 mg/l, 0,0125 mg/l, 0,025 mg/l ont été préparées (Tableau 3).

10 larves de stade 3 et 4 ont été prélevées à l'aide d'une pipette pasteur et mises dans des gobelets de 5 cm du diamètre, contenant chacun 99 ml d'eau du gîte (par introduction d'un millilitre de chaque solution ainsi diluée dans les gobelets précédemment préparés, pour le témoin on introduit 1ml éthanol). Trois répétitions ont été réalisées pour chaque dilution ainsi que pour le témoin.

Parmi les insecticides utilisés dans la lutte antivectorielle, nous avons choisi de tester le Téméphos et le Malathion.

Après un temps de contacte de 24 h, on dénombre les larves mortes et vivantes.

On calcule le pourcentage de mortalité chez les témoins en utilisant la formule :

Le test est considéré valide si le pourcentage de mortalité chez les témoins est inférieur à 5% ou compris entre 5% et 20%.

Si le pourcentage de mortalité chez les témoins est compris entre 5% et 20%, la mortalité après exposition doit être Corrigée en utilisant la formule d'Abbott (OMS, 2004a).

% Mortalité corrigée = (%Mort.Observée - %Mort.Témoin/100- % Mort.Témoin) ×100

Si la mortalité chez les témoins excède 20 %, le test est invalide et doit être recommencé.

RÉSULTATS ET DISCUSSION

L'identification botanique des 20 espèces végétales récoltées au niveau du jardin expérimental de l'Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques (INPMA) de Taounate est représentée dans le tableau suivant :

Tableau 4. Identification botanique des espèces végétales récoltées au niveau de l'INPMA.

Code	Espèce végétale	Famille botanique	Date de récolte
INP 216	Thymus vulgaris L.	Lamiaceae	10 Mai 2010
INP 217	Mentha pulegium L.	Lamiaceae	11 Mai 2010
INP 219	Myrtus communis L.	Myrtaceae	04 Mai 2010
INP 223	Citrus aurantium L.	Rutaceae	05 Mai 2010
INP 225	Rosmarinus officinalis L.	Lamiaceae	02 Mai 2010
INP 227	Tamarix africana Poir.	Tamaricaceae	12 Mai 2010
INP 229	Olea europaea L.	Oleaceae	11 Mai 2010
INP 230	Argania spinosa (L.) Skeels	Sapotaceae	12 Mai 2010
INP 231	Ceratonia siliqua L.	Leguminosae	11 Mai 2010
INP 233	Mentha piperita L.	Lamiaceae	05 Mai 2010
INP 236	Salvia officinalis L.	Lamiaceae	09 Mai 2010
INP 238	Lavandula angustifolia L.	Lamiaceae	04 Mai 2010
INP 240	Pelargonium Graveolens	Geraniaceae	08 Mai 2010
INP 242	Origanum majorana L.	Lamiaceae	10 Mai 2010
INP 243	Artemisia absinthium L.	Asteraceae	09 Mai 2010
INP 245	Nerium oleander L.	Apocynaceae	08 Mai 2010
INP 246	Mentha suaveolens Ehrh.	Lamiaceae	08 Mai 2010
INP 248	Cistus ladanifer L.	Cistaceae	02 Mai 2010
INP 249	Eucalyptus cladocalyx F.Muell.	Myrtaceae	11 Mai 2010
INP 251	Eucalyptus camaldulensis	Myrtaceae	16 Mai 2010

La teneur en eau présente dans la poudre des six espèces végétales testées :

Tableau 5. Taux d'humidité présent dans la poudre des 6 espèces végétales testées.

Le taux d'humidité nous donne une idée sur la dégradation des principes actifs de la plante. Les poudres de Rosmarinus officinalis et Mentha pulegium présente des taux d'humidité élevés par rapport aux autres, ce qui présente un risque de dégradation du principe actif.

Tableau 6. Estimation des quantités du résidu sec des 6 espèces végétales testées.

L'estimation des quantités du résidu sec nous renseigne sur la quantité de poudre végétale présente dans les extraits aqueux, les quantités du résidu sec les plus importants sont présentes respectivement dans les extraits aqueux du Nerium oleander et Rosmarinus officinalis.

Les huiles essentielles de l'Eucalyptus camaldulensis, Salvia officinalis, Rosmarinus officinalis et du Thymus vulgaris présentent les rendements les plus élevés.

Ces différences dans le rendement doivent être essentiellement dues à la différence de morphologie des plantes

Il faut noter que le rendement et la composition chimique des HE dépendent de plusieurs facteurs à savoir l'espèce, le milieu de récolte, la période de récolte, les pratiques culturales et la technique d'extraction.

3.5 Analyse de la composition chimique par chromatographie en phase gazeuse et couplage chromatographie en phase gazeuse - spectrométrie de masse :

- Origanum majorana

La marjolaine douce (Origanum majorana) est une plante pérenne et herbacée qui pousse dans son environnement naturel qui est l'Egypte et les pays de l'Est de la Méditerranée (Furia et Bellanca, 1971). Elle peut pousser dans les régions de l'Europe du Nord (Hälvä, 1987).

La composition des huiles de diverses espèces d'origan a été étudiée (Nykanen, 1986 ; Ravid et Putievsky, 1986 ; Lawrence, 1989 ; Komaitis et al., 1992 ; Baser et al., 1993). Elles existent sous deux formes : la première est composée d'hydrate de sabinene et terpinén-4-ol comme composés majoritaires, et la seconde avec le thymol et/ou carvacrol en tant que composés prédominants.

Le tableau 8 montre la composition chimique de l'huile essentielle d'Origanum majorana. Les hydrocarbures monoterpéniques constituent la fraction majoritaire, suivis par les monoterpènes oxygénés avec 44.38%. Les sesquiterpènes qui sont tous des hydrocarbures ne représentent que 3.68% de l'ensemble des constituants identifiés (99.76%).

- Rosmarinus officinalis

Rosmarinus officinalis L. est une espèce de la famille des Lamiaceae, qui est utilisée comme aromatisant alimentaire, est aussi connue pour ses propriétés médicinales (Oluwatuyi et al., 2004, Peng et al., 2005).

Les constituants identifiés de la composition chimique de l'huile essentielle de Rosmarinus officinalis sont représentés dans le tableau 9 et constituent un pourcentage de 99.67%, dont la fraction monoterpénique est la majoritaire (94.89%). 51.93% de cette fraction sont des hydrocarbures, et 41.96 % sont des composés oxygénés. La fraction sesquiterpénique est la plus faible avec 4.78% et constituée seulement de composés hydrocarbonés. L'á-pinène est l'élément majoritaire avec une teneur de 35.91%, suivi du 1,8-cinéole avec 23.64%.

Tableau 9. Composition chimique de l'HE du Rosmarinus officinalis (chemotype à á-pinène).

- Thymus vulgaris

Thymus vulgaris, cultivé au Maroc, donne une huile essentielle à thymol dont le pourcentage dépasse les 40% (Tableau 10). La fraction monoterpénique prédomine avec (97.35%) dont 46.5% sous forme d'hydrocarbures et 50.85% sous forme de composés oxygénés. Les hydrocarbures sesquiterpéniques ne représentent qu'un faible pourcentage (1.7%). Les constituants de l'huile du thym ont été identifiés avec une totalité de 98.85%.

Nous avons choisi de travailler sur le Culex pipiens et l'Anophèles labranchiae.

Nous n'avons pas pu travailler sur des gîtes à caractère permanent du faite que l'ensemble de ces gîtes sont ensemencés par la Gambusia, poisson larvivore utilisé en abondance dans les gîtes de Fès pour lutter contre les larves de moustiques.

Nous nos sommes alors contenter de travailler sur des gîtes temporaire à culex.

ï Expérimentation 1: Détermination de l'effet larvicide de 6 extraits aqueux.

Tableau 12. Mortalité (%) des larves de Culex pipiens en fonction de la concentration des extraits aqueux (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition

Espèce végétale	Doses testées %		Conditions de T° et H.R		%Mortalité après 24h
	Dose %	Concentration %	T °c	H.R %	%Mortalité Témoin	%Mortalité
*Artemisia absinthium L.*	10	5	30,4	25	0	0
		6				0
		7				0
		8				0
		9				0
*Mentha piperita L.*	10	5	30,4	25	0	3,7
		6				4
		7				0
		8				0
		9				11,54
*Mentha pulegium L.*	10	5	23,6	40	3,57	741
		6				0
		7				0
		8				6,66
		9				3,57
*Nerium oleander L.*	10	5	30,4	25	0	0
		6				0
		7				0
		8				10,71
		9				12,5
Rosmarinus officinalis L.	10	5	23,6	40	0	0
		6				0
		7				0
		8				5,55
		9				5,55
*Myrtus communis L.*	10	5	30,4	25	0	0
		6				0
		7				0
		8				0
		9				3,57

Tableau 13. Mortalité (%) des larves de Culex pipiens en fonction de la concentration des extraits aqueux (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition.

Espèce végétale	Doses testées %		Conditions de T° et H.R		%Mortalité après 24h
	Dose %	Concentration %	T °c	H.R %	%Mortalité Témoin	%Mortalité
*Artemisia absinthium L.*	10	5	29,2	30	0	0
		6				6,89
		7				0
		8				0
		9				6,89
*Mentha piperita L.*	10	5	29,2	30	0	11,11
		6				6,66
		7				16
		8				12,5
		9				15,38
*Mentha pulegium L.*	10	5	29,2	30	0	0
		6				0
		7				0
		8				0
		9				8
*Nerium oleander L.*	10	5	29,2	30	0	0
		6				2
		7				26,92
		8				21,74
		9				44,44
Rosmarinus officinalis L.	10	5	29,2	30	0	8,33
		6				8,33
		7				16,66
		8				12
		9				28,57
*Myrtus communis L.*	10	5	29,2	30	0	0
		6				0
		7				0
		8				0
		9				0

Tableau 14. Moyenne de Mortalité (%) des larves de Culex pipiens de 2 répétitions en fonction de la concentration des extraits aqueux (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition.

Figure 21. Pourcentages de mortalité suivant les extraits aqueux des 6 espèces végétales testés.

Après avoir exposé des larves du stade 3 et 4 de l'espèce Cx. pipiens aux différentes concentrations des six extraits aqueux pendant 24 h, le taux de mortalité varie selon les concentrations (Tableau 12,13 et 14). Pour tous les extraits la mortalité des larves atteint des taux inferieur à 50%.

De l'ensemble de ces résultats un premier classement de l'efficacité toxique des extraits testés est mis en évidence (figure 21), ainsi les extraits les plus toxiques sont ceux des feuilles du Nerium oleander, du Rosmarinus officinalis et du Mentha piperita et le moins toxique celui des feuilles du Myrtus communis.

Les testes ont montrés que parmi les 6 extraits testés, aucun ne s'est révélé intéressant en terme de toxicité. Ces résultats, bien qu'ils soient préliminaires, illustrent bien l'intérêt que présentent les extraits aqueux des plantes dans la lutte anti-larvaire.

ï Expérimentation 2: Détermination de l'effet larvicide de 6 huiles essentielles.

Tableau 15. Mortalité (%) des larves de Culex pipiens en fonction de la concentration des huiles essentielles (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition.

Espèce végétale	Doses testées %		Conditions de T° et H.R		%Mortalité après 24h
	Dose %	Concentration %	T °c	H.R %	%Mortalité Témoin	%Mortalité
Rosmarinus officinalis L.	2	0,4	21,9	42	7,14	100
		0,6				100
		0,8				100
		1				100
	0,1	0,05	24,1	41	9,52	3,29
		0,06				3,89
		0,07				11,58
		0,08				47,37
		0,09				47,14
	0,5	0,1	26,7	32	13,33	69,23
		0,2				96 ,14
		0,3				96,14
		0,4				100
		0,5				96,14
*Eucalyptus camaldulensis L.*	2	0,4	21,9	42	3,45	100
		0,6				100
		0,8				100
		1				100
	0,1	0,05	24,1	41	13,63	27,63
		0,06				62,7
		0,07				20,78
		0,08				93,89
		0,09				65,69
	0,5	0,1	31,5	28	4,16	8,33
		0,2				9,52
		0,3				3,84
		0,4				7,41
		0,5				20,83
*Salvia officinalis L.*	0,1	0,05	21,1	41	13,63	10,53
		0,06				14,41
		0,07				65,69
		0,08				73,27
		0,09				96,13
	0,5	0,1	31,5	28	4	8
		0,2				5
		0,3				81,82
		0,4				82,76
		0,5				96,43

Tableau 15. Mortalité (%) des larves de Culex pipiens en fonction de la concentration des huiles essentielles (%) de 6 espèces végétales après 24 heures d'exposition (suite).

Espèce végétale	Doses testées %		Conditions de T° et H.R		%Mortalité après 24h
	Dose %	Concentration %	T °c	H.R %	%Mortalité Témoin	%Mortalité
*Thymus vulgaris L.*	2	0,4	21,9	42	7,14	100
		0,6				100
		0,8				100
		1				100
	0,5	0,1	26,7	32	10	96,16
		0,2				92,33
		0,3				96,28
		0,4				100
		0,5				100
*Artemisia absinthium L.*	2	0,4	23,3	33	8,51	51,20
		0,6				77,73
		0,8				67,61
		1				81,47
	0,5	0,1	26,7	32	13,33	8,47
		0,2				38,45
		0,3				68,16
		0,4				76,92
		0,5				73,07
*Origanum majorana L.*	0,5	0,1	31,5	28	0	35,29
		0,2				56
		0,3				83,33
		0,4				96,43
		0,5				100

Figure 22. Effet larvicide des huiles essentielles (0,1%) de Rosmarinus officinalis, Eucalyptus camaldulensis et Salvia officinalis sur culex pipiens.

Figure 23. Effet larvicide des huiles essentielles (0 ,5 %) de Rosmarinus officinalis, Eucalyptus camaldulensis ,Salvia officinalis , Thymus vulgaris ,Artemisia absinthum et Origanum majorana sur culex pipiens .

Figure 24. Effet larvicide des huiles essentielles (2 %) de Rosmarinus officinalis, Eucalyptus camaldulensis,Thymus vulgaris et Artemisia absinthum sur culex pipiens .

Tableau 16. Mortalité (%) des larves d'Anopheles labranchiae en fonction de la concentration d'huile essentielle (%) d'Eucalyptus camaldulensis L. après 24 heures d'exposition.

Nous avons effectués un seul teste sur l'Anopheles labranchiae, vecteur du paludisme au Maroc, avec seulement deux concentration de l'huile essentielle d'Eucalyptus camaldulensis du fait de sa présence en très faible densité dans les gîtes étudiés.

Les résultats des tests d'activités larvicides réalisés sur les huiles essentielles (Figure 22, 23 et 24 et Tableau 15) indiquent une relation directe des pourcentages de mortalité des larves avec la concentration en huiles essentielles.

Les concentrations minimales nécessaires pour obtenir 100 % de mortalité des larves de Culex pipiens ont été évaluées à 0,4 % pour Thymus vulgaris, Rosmarinus officinalis et Eucalyptus camaldulensis et à 0,5 % Origanum majorana.

Les huiles essentielles que nous avons testées sont donc toutes larvicides, avec un effet concentration-dependant.

Tableau 17. Concentrations létales CL50 et CL95 (24 h) des huiles essentielles de 6 espèces végétales à l'égard des larves de Culex pipiens.

L'effet toxique des extraits analysés est clairement mis en évidence avec les valeurs des CL50 et des CL95 : les huiles essentielles de Salvia officinalis, Rosmarinus officinalis et Origanum majorana demeurent les plus efficaces, avec des valeurs respectives de 0,065 % et 0,49 %, 0,095 % et 0,195 %, 0,17 % et 0,37 %.

Ces résultats, se sont révélés intéressants en terme de toxicité, ils illustrent l'intérêt que présentent les huiles essentielles dans la lutte anti-larvaire.

ï Expérimentation 3: Comparaison entre l'action des extraits de plantes et celle des insecticides sur les larves de moustiques.

Tableau 18. Mortalité (%) des larves de culex pipiens en fonction de la concentration d'insecticides (mg/l) du Téméphos et Malathion après 24 heures d'exposition.

Figure 25. Effet larvicide du Téméphos et du Malathion sur les larves de culex pipiens après 24 heures d'exposition.

Les résultats obtenus (Tableau 18) montrent que les larves de Culex pipiens sont plus sensibles au Téméphos qu'au Malathion. À partir de la concentration 0,0025 mg/l en Téméphos nous avons obtenu 100 % de mortalité.

Tableau 19. Concentrations létales CL50 et CL95 (24 h) des insecticides à l'égard des larves de Culex pipiens.

L'effet toxique des deux insecticides testés est clairement mis en évidence avec les valeurs des CL50 et des CL95 : le Téméphos demeure le plus efficace avec une valeur de CL95 : 0,00219 mg/l et avec un taux de résistance de 0,82.

Tableau 20. Conditions de température et d'humidité Relative durant la réalisation des tests.

Les valeurs représentées dans le tableau 20 et figure 26 montre les variations de température et d'humidité relative notés au cours des testes, ces deux paramètres peuvent avoir un effet sur les larves et par conséquence sur le taux de mortalité.

La température idéale pour la réalisation des tests doit être de 25 à 27°c et l'humidité relative doit être de 70 à 80 %.

Au début de nous testes nous avons travaille avec l'eau distillée à la place de l'eau du gîte, or les résultats des testes était invalides. Cela peut être expliqué par le fait que les larves on besoin l'eau dans laquelle elles trouvent leur nourriture c'est à dire riche en particule organique. L'eau distillée est une eau qui a subie une distillation et qui est théoriquement ainsi exempte des minéraux et organismes que l'on pourrait retrouver dans l'eau « naturelle ».

Parmi les testes effectues, les résultats obtenus par les huiles essentielles montrent que celle-ci possèdent un effet larvicide intéressant sur des larves au stade 3 et 4 et particulièrement les huiles essentielles de Salvia officinalis, Rosmarinus officinalis et Origanum majorana qui demeurent les plus efficaces, avec des valeurs de CL50 et CL95 respectives de 0,065 % et 0,49 %, 0,095 % et 0,195 %, 0,17 % et 0,37 %.

Les résultats obtenus par les extraits aqueux des poudres végétales, ont montré qu'aucun des 6 extraits testés ne s'est révélé intéressant en terme de toxicité, malgré cela ces résultats illustrent bien l'intérêt que présentent les extraits aqueux des poudres végétales dans la lutte anti-larvaire. L'extrait de Nerium oleander et celui de Rosmarinus officinalis présentent les taux de mortalités les plus importants par rapport au autres extraits avec des valeurs respectives de 28,47 % et 17,06 %.

Par ailleurs, la toxicité de l'extrait de Nerium oleander a été étudiée sur des larves au stade 4 de Culex pipiens dans les travaux de Aouinty et al. (2006) les essais ont démontré une activité insecticide avec une CL50 de 3130 mg/l.

Pour les insecticides le Téméphos reste le plus important en terme de toxicité avec une CL95 de 0,00219 mg/l.

Les conditions de température et d'humidité relative peuvent avoir un effet sur les résultats obtenus, ainsi que l'émergence des larves du stade 4 en nymphes.

L'ensemble de ces résultats montre que les insecticides utilisés dans la lutte antilarvaire se sont révélés très efficaces contre Culex pipiens par rapport aux extraits aqueux et aux huiles essentielles.

Néanmoins, les huiles essentielles en particuliers celles de Salvia officinalis, Rosmarinus officinalis et Origanum majorana, ont présentés une activité importante vis à vis des larves.

Nous ne pouvons pas conclure quant à l'action de l'huile essentielle de l'Eucalyptus camaldulensis sur l'Anophèle labranchiae du faite de la faible densité utilisé dans le test.

CONCLUSION ET PERSPECTIVES

L'utilisation des insecticides de synthèse, de plus en plus réglementée pour la protection de l'environnement, est à l'origine de nombreux cas de résistance chez les insectes. Dans ce contexte, le recours à des molécules naturelles (d'intérêt écologique et économique) aux propriétés insecticides ou insectifuges, se révèle être une démarche alternative à l'emploi des insecticides de synthèse.

L'utilisation des extraits de plantes comme insecticide est connue depuis longtemps.

Lors de cette étude, nous avons procédé à l'extraction des huiles essentielles de six plantes cultivées à l'Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques de Taounate, à leur analyse chimique et à l'évaluation de leur potentiel larvicide sur Culex pipiens ainsi que les extraits aqueux des poudres végétales.

Pour les extraits aqueux les résultats obtenus bien que préliminaires, témoignent d'une bonne activité larvicide des extraits aqueux des poudres végétales.

Concernant les huiles essentielles, nos résultats montrent que toutes les huiles essentielles testées possèdent un effet larvicide significatif. Tous les échantillons ont montré une activité sur des larves au stade 3 et 4, et particulièrement les huiles essentielles de Salvia officinalis , Origanum majorana et Rosmarinus officinalis.

Ces résultats ouvrent des perspectives intéressantes pour l'application des huiles essentielles et extraits aqueux des poudres végétales dans la production des biocides.

Nous envisageons de poursuivre cette étude a?n de préciser la nature des composés responsables de l'activité par un fractionnement mené en parallèle avec les tests biologiques.

Comme nous envisageons également de travailler avec des concentrations d'extraits aqueux plus importantes, et d'évaluer l'activité larvicide des autres espèces végétales récoltées.

Références bibliographiques

Adams R.P., 2001. Identification of Essential Oil Components by Gaz Chromatography / Quadrupole Mass Spectroscopy. Carol Stream, IL., USA: Allured Publishing Co.

Adisso D. N., Alia A.R., 2005. Impact des fréquences de lavage sur l'efficacité et la durabilité des moustiquaires à longue durée d'action de types Olyset Net ® et Permanet ® dans les conditions de terrain. Mémoire de fin de formation en. ABM-DITEPAC-UAC, Cotonou. 79p.

Aouinty B. et al., 2006. Évaluation préliminaire de l'activité larvicide des extraits aqueux des feuilles du ricin (Ricinus communis L.) et du bois de thuya (Tetraclinis articulata (Vahl) Mast.) sur les larves de quatre moustiques culicidés : Culex pipiens (Linné), Aedes caspius (Pallas), Culiseta longiareolata (Aitken) et Anopheles maculipennis (Meigen), Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 10 (2), 67 - 71.

AYITCHEDJI A.M., 1990. Bioécologie d'Anopheles melas et de Anopheles gambiae s.s. Comportement des adultes vis-à-vis de la transmission du paludisme en zone côtière lagunaire, République du Bénin. Mémoire de fin de formation en TLM-DETS-CPU-UNB, Cotonou. 76p.

Baser K.H.C, Kirimer N., Tuèmen G., 1993. Composition of the essential oil of Origanum majorana L. from Turkey. J. Essent. Oil Res. 5: 577-579.

Bekele J. et Hassanali A., 2001. Blend effects in the toxicity of the essential oil constituents of Ocimum kilimandscharicum and Ocimum kenyense (Labiatae) on two post-harvest insect pests. Phytochemestry, 57 : 385 - 391.

Boulet A., 2005. Lutte contre la pollution des eaux par les pesticides utilisés en zones non agricoles : analyse et synthèse des actions engagées et recommandations. Institut National Agronomique de Paris - Grignon,p5.

Bouzouita N., Kachouri F., Hamdi M., Chaabouni MM., Ben Aissa R., Zgoulli S., Thonart P., Carlier A., Marlier M., Lognay G.C., 2005. J. Essent. Oil Res. 17, 584.

Brian M.L., 1995. The isolation of aromatic materials from plant products, R.J. Reynolds Tobacco Company, Winston- Salem (USA), p.57-148.

Bruneton J., 1993. Pharmacognosie: phytochimie, plantes médicinales. 2^ième éd. Tec. et Doc., Lavoisier, Paris, France.

Chandre F., Darriet F., Manga L., Akogbeto M., Faye O., Mouchet J., et Guillet P., 1999. Situation de la résistance aux pyréthrinoïdes chez Anopheles gambiae sensu lato. Bulletin of the World Health Organization., 77(3): 230-234.

Detinova TS., 1963. Méthodes à appliquer pour classer par groupe d'âge les Diptères présentant une importance médi-cale, notamment certains vecteurs du paludisme. OMS, série monogr n°47, Genève, 220 p.

Diabaté A., 1999. Evaluation de la résistance des vecteurs du paludisme vis à vis des pyréthrinoïdes au Burkina Faso. Thèse de Doctorat de feme cycle en sciences biologiques appliquées, option Biologie et Ecologie Animales. Université d'Ouagadougou, Burkina Faso l28p.

EL Bouhali., 2001. Etude physico-chimique, bactériologique et faunistique à l'interface superficielle de deux cours d'eau dans la vallée sud de l'Oued-Fès, thése de doctorat.Univercité Sidi Mohamed Ben Aabd Lah Dhar El Mahraz, Fès.

El Ouali Lalami A.et al., 2009. Le paludisme importé dans le Centre Nord du Maroc entre 1997 à 2007. Cahiers d'études et de recherches francophones / Santé. Volume 19, Numéro 1, 43-7.

Faraj C., Adlaoui B., Rhajaoui M. et Lyagoubi M., 2003. Malaria transmission estimation in high-risk provinces of Morocco. La Revue de Santé de la Méditerranée orientale,9, 542-547.

Faraj C., Elkohli M. et Lyagoubi M., 2006. Cycle gonotrophique de Culex pipiens (Diptera : Culicidae), vecteur potentiel du virus West Nile, au Maroc : estimation de la durée en laboratoire, 2006, Bull Soc Pathol Exot, 99, 2, 119-121.

Fillinger U., Knols B. G. and Becker N., 2003. Efficacy and efficiency of new Bacillus thuringiensis var israelensis and Bacillus sphaericus formulations against Afrotropical anophelines in Western Kenya. Trop Med Int Health 8(1): 37-47.

Furia TE., Bellanca N., 1971. Fenaroli's handbook of flavor ingredients. The Chemical Rubber Co., Cleveland, OH.

Janssen A. M., Scheffer J. J.C., Baerheim Svendsen A., 1987. Pharm. Weekbl. 9, 193.

Joulain D., König W.A., 1998. The Atlas of Spectral Data of Sesquiterpene Hydrocarbons. Hambourg: E.B.Verlag, 405 p.

Hälvä S., 1987. Studies on production techniques of some herb plants. J. Agr. Sci. Fin. 59: 31-36.

Heath H. B., 1978. In In flavor technology. Westport, Connecticut: AVI publishing company, Inc.

Harrack M.E., LE Guenno B., et LE Gounon P., 1997. Isolement du virus West Nile au Maroc. Virologie, 1, 248-249.

Himmi O., 2007. Les culicidés (insectes, diptères) du Maroc : systématique, écologie et études épidémiologiques pilotes, 289 pages.

Hougard JM., Duchon S., Darriet F., Zaim M., Rogier C., et Guillet P., 2003. Comparative performances, under laboratory conditions, of seven pyrethroidinsecticides used for impregnation of mosquito nets. Bulletin ofthe World Health Organization, 81:324-333.

INH, 2002. LABORATOIRE D'ENTOMOLOGIE MÉDICALE - Enquête entomologique dans les foyers du West Nile au Maroc. Rapport de mission, Institut National d'Hygiène, Rabat, 3p.

Iroko F.A., 1994. Une histoire des hommes et des moustiques en Afrique. Côte des esclaves (XVI^e - XIX^e siècle). L'harmattan, 1994. Racines du présent. 169 p.

Isman, 2000. Plant essential oils for pest and disease management. Crop Protection 19 (2000) 603-608.

Gildemeister E., Hoffmann F., 1919. Les huiles essentielles, 2e éd., Tome III, Ed. Miltitz, p.634-635.

Glaser A., 1999. West Nile virus and North America: An unfolding story. Revue Scientifique et Technique de l'Office International des Epizooties, 2004, 23, 557-568.

Guillaumot L., 2006. Les moustiques et la dengue. Institut Pasteur de Nouvelle Caledonie. 15 p. Article. Site: Institut Pasteur.

Guy Y., 1976. Bilan épidémiologique du paludisme au Maroc (données recueillies entre 1960, 1961 et 1962). Ann Parasitol Hum Comp, 1963, 38, 823-857

Kitron U., 1998. Landscape ecology and epidemiology of vector-borne diseases: tools for spatial analysis. J Med Entomol 35(4): 435-45.

Komaitis ME., Infanti-Papatragianni N., Melissari-Panagiotou E., 1992. Composition of the essential oil Marjorana L. Food Chemistry 45: 117-118.

Mohan D. et Ramaswamy M., 2007. Evaluation of larvicidal activity of the leaf extract of a weed plant, Ageratina adenophora, against two important species of mosquitoes, Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus. African Journal of Biotechnology Vol.6(5), pp.631-638.

Mompon B., 1994. Quel avenir commercial pour les produits obtenus par les nouvelles technologies d'extraction : CO₂, Micro-ondes, ultrasons, nouveaux solvants, 4 ^ième rencontres internationales de Nyons, p. 149-166.

Murgue B., Murri S., Triki H., Deubel V. et Zeller HG., 2001. West Nile in the Mediterranean basin: 1950-2000. Ann N Y Acad Sci, 951, 117-126.

Ntonifor NN. et al., 2006. Traditional use of indigenous mosquito-repellents to protect humans against mosquitoes and other insect bites in a rural community of Cameroon. East Afr Med J. 83(10):553-8.

Nykanen I., 1986. High resolution gas chromatographic#177;mass spectrometric determination of the flavour composition of marjoram (Origanum majorana L.) cultivated in Finland. Z. Lebensm. Unters. Forch. 183: 172-176.

Oluwatuyi M., Kaatz G. W., et Gibbons S., 2004. Antibacterial and resistance modifying activity of Rosmarinus officinalis. Phytochemistry, 65, 3249-3254.

OMS, 1974. Manuelle pratique de lutte antilarvaire :division du paludisme et autre maladie parastaire,OMS, Genève.7-17

OMS, 1999. La lutte antivectorielle - Méthodes à usage individuel et communautaire - Sous la direction de Jan A. Rozendaal (OMS, 1999).

OMS, 2003. Entomologie du paludisme et contrôle des vecteurs: Guide du stagiaire. Provisoire, OMS, Genève. 102 p.

OMS, 2004. Organisation Mondiale de la Santé - Global Strategic Framework for Integrated Vector Management, Geneva, 2004.

OMS, 2004a. Lutte contre les vecteurs du paludisme.WHO/CDS/WHOPES/2002.5Rev.1

OMS, 2004b. Questions fréquemment posées à propos de l'utilisation du DDT pour la lutte antivectorielle. WHO/HTMlRBMl2004.54

Palmisano CT., Taylor V., Caillouet K., Byrd B. et WES-SON DM., 2005. Impact of West Nile virus outbreak upon St. Tammany Parish Mosquito Abatement District. J Am Mosq Control Assoc, 21, 33-38.

Peng Y., Yuan J., Liu F. et Ye J., 2005. Determination of active components in rosemary by capillary electrophoresis with electrochemical detection. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 39, 431-437.

Philogene B.J.R., 1991. L'utilisation des produits naturels dans la lutte contre les insectes: problèmes et perspectives. La lutte anti-acridienne. Ed. AUPELF-UREF,John Libbey Eurotext, Paris (c) 1991, pp. 269-278.

Poinsignon A., 2008. Étude de la relation homme-vecteur. De l'identification à la validation de protéines salivaires comme marqueur immunologique d'exposition aux piqûres d'Anopheles spp. et de Glossina spp. UNIVERSITÉ MONTPELLIER I Faculté de Médecine, France.

Purse B.V. et al., 2005. Climate change and the recent emergence of bluetongue in Europe. Nature Reviews Microbiology, 3, 171-181.

Ravid U., Putievsky E., 1986. Carvacrol and thymol chemotypes of East Mediterranean wild labiatae herbs. In Progress in Essential Oil Research, EJ Brunke & W. de Gruyter Edit., Berlin.

Ribeiro J.M., 1995. Blood-feeding arthropods: live syringes or invertebrate pharmacologists? Infect Agents Dis 4(3): 143-52.

Rodhain F. et al., 1985. Précis d'entomologie médicale et vétérinaire, 443 pages, Ed. Maloine, Paris.

Rodhain F., Perez C., 1985. Précis d'Entomologie Médicale et Vétérinaire. Maloine, s.a. 114 p.

Rogier C., Tall A., Diagne N., Fontenille D., Spiegel A., et al., 1999. Plasmodium falciparum clinical malaria: lessons from longitudinal studies in Senegal. Parassitologia 41(1-3): 255-9.

Samate Abdoul D., 2001. Composition chimique d'huiles essentielles extraites de plantes aromatiques de la zone soudanienne du Burkina Faso : Valorisation, thèse de doctorat, Univ.de Ouagadougou, Burkina Faso.

Savage H.M. et Miller B., 1995. House Mosquitoes of the U.S.A., Culex pipiens Complex. Wing Beats, 6, 8-9.

Schuffenecker I., Peyrefitte C.N., El harrak M., Murri S., Leblond A. et Zeller H.G., 2005.