II-2.4. Dosage des paramètres biochimiques
sanguins
II-2.4.1. Détermination des métabolites
sériques
Les paramètres biochimiques sériques
déterminés à la fin de l'expérience sont
effectués à l'aide d'un appareil multifonctionnel de marque RAYTO
CHEMRAY-120. Ils ont concerné : les valeurs moyennes de
triglycérides, cholestérol total, cholestérol-HDL,
cholestérol-LDL, acides uriques, créatinine, glycémie,
bilirubine total et conjuguée, urée, protéine totale,
glutamine gama transférase (GGT), aspartate amino transférase
(ASAT), alanine amino transferase (ALAT) et phosphatâte alcaline (PAL).
De plus, le taux de certains minéraux sanguins tels que le sodium (Na),
le potassium (K), le magnésium (Mg), le phosphore (P), le calcium (Ca)
et le fer (Fe) sont également déterminés.
II-2.4.1.1. Triglycérides
C'est le test enzymo-colorimétrique (Young
et al., 1975) qui permet le dosage des triglycérides
circulants du sang. Selon le principe, les triglycérides sont
hydrolysés en glycérol et en acides gras libres. Le
glycérol libéré réagit avec la glycérol
kinase et la glycerol-3-phosphate oxydase pour donner l'eau
oxygénée (H2O2).
II-2.4.1.2. Cholestérol total
Le cholestérol est mesuré après hydrolyse
enzymatique puis oxydation. L'indicateur quinone imine est formé
à partir du peroxyde d'hydrogène et de l'amino 4 antipyrine en
présence de phénol et de peroxydase. La quantité de
quinone imine formée est proportionnelle à la concentration de
cholestérol.
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II-2.4.1.3. Cholestérol-HDL
Le surnagent obtenu après centrifugation du sang
contient les lipoprotéines de haute densité (HDL) dont le
cholestérol est dosé avec un réactif, la
cholestérol-oxydase. Les chylomicrons et les lipoprotéines de
très faible densité (VLDL) et de faible densité (LDL)
contenus dans l'échantillon sont précipités par addition
d'acide phosphotungstique en présence d'ions magnésium.
II-2.4.1.4. Cholestérol-LDL
Le cholestérol-LDL, est déterminé par
calcul selon la formule décrite par Friedewal et al.
(1972). Elle est calculée à partir de l'expression
suivante :
LDL = CT - HDL - (16)
Avec : LDL=cholestérol-LDL, CT=cholestérol total,
HDL=cholestérol-HDL et TG=triglycéride
II-2.4.1.5. Urée
Le test a été effectué par dosage
cinétique dans lequel le début de la réaction est
linéaire dans un intervalle de temps défini (Kaplan
et al., 1988). L'urée de l'échantillon a
été hydrolysée par l'uréase en ammoniaque et en
dioxyde de carbone. La seconde réaction, catalysée par le
glutamate déshydrogénase, convertit l'ammoniaque et
l'á-cétoglutarate en glutamate et en eau, avec oxydation
simultanée de la nicotinamide-adénine-dinucléotide
réduite en nicotinamide-adénine-dinucléotide. La
décroissance initiale de la densité optique à 340 nm est
proportionnelle à la concentration d'urée dans
l'échantillon.
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