II.4 Evaluation de l'activité antidermatophytique
in vivo de la fraction résiduelle de Tristemma hirtum
L'évaluation de l'activité antidermatophytique
in vivo a été effectuée en plusieurs
étapes suivant les méthodes décrites par Iwata et
al.(1989) et Cavalcanti et al.(2002).
II.4.1Préparation de l'inoculum et
conditionnement des animaux
e) Préparation de l'inoculum
Dans un premier temps, une suspension de spores a
été préparée en ajoutant 5 ml d'eau physiologique
dans une boîte de Pétri de 55 mm de diamètre contenant une
culture de T. mentagrophytes âgée de trois semaines. La
surface de cette culture a été brossée très
doucement. La suspension obtenue a été filtrée à
l'aide d'un papier filtre qui retient les fragments de mycélium et
laisse passer les spores. Des dilutions successives ont permis d'ajuster le
nombre de spores à environ 106 UFC/ml. L'inoculum ainsi
préparé a été utilisé pour l'infection des
animaux.
f) Conditionnement des animaux
Une aire de 4×4 cm du dos de chaque cochon d'Inde a
été rasée à l'aide d'une lame, puis une zone de 2
cm de diamètre à l'intérieur de cette aire a
été frottée avec du papier vert n° 120 tout en
évitant de blesser l'animal.
II.4.2 Infection des animaux
Cinq cents ul d'inoculum (105 spores)
préalablement préparé ont été
déposés sur la zone frottée. Cette zone a ensuite
été recouverte d'une compresse maintenue en place à
l'aide d'un ruban adhésif pour une durée de 24 h. Trois jours
après inoculation, des observations microscopiques et des cultures des
prélèvements sur milieu SDA, ont permi de savoir si l'infection
était établie.
II.4.3 Formulation de la pommade et traitement des
animaux
Trente grammes de beurre de karité ont
été introduits dans un mortier, puis chauffés au bain
marie (100°C) jusqu'à dissolution complète (5 min environ).
15 ml d'eau distillée et 0,25 g de sulfure y ont été
ajoutés, et le mélange a été agité
jusqu'à homogénéisation totale. 7,5 g de cire d'abeille
ont ensuite été ajoutés, et le tout a été
porté au bain marie (100°C) pour une solubilisation totale. Deux
concentrations de la fraction dans la pommade ont été obtenues
comme indiqué dans le tableau ci-dessous.
Tableau 2: Formulation de la pommade
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Masse (en gramme) des ingrédients pour 10g de
pommade(p/p) %pommade
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Véhicule
Extrait
9,5 0,5
5%
9,75 0,25
2 ,5%
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Véhicule :beurre de karité+sulfure+cire
d'abeille
Les aspects physiques des pommades obtenues sont illustrés
par la photographie5
Photographie 1:Aspect
physique des différentes pommades.
Deux lots d'animaux (L1,
L2) ont été traités respectivement à l'aide des
pommades à 2,5% et 5% à raison de 0,1g par
application et deux applications par jour. Les animaux des lots L3 et L4 ont
été traités de la même manière à
l'aide du véhicule et de la griséofulvine (témoin positif)
respectivement. Le lot L5 n'a reçu aucun traitement (témoin
négatif). Le traitement a duré 3 semaines au cours desquelles les
animaux étaient observés quotidiennement.
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