4. Analyse bactériologique
L'objectif de l'analyse bactériologique de nos
échantillons n'est pas d'effectuer un inventaire de
toutes les especes présentes mais de rechercher les pathogènes
qui accompagnent les indicateurs de contamination fécale. Les germes
test recherchés sont les coliformes totaux, fécaux, les
staphylocoques.
· Analyse de l'eau :
L'eau peut contenir des micro-organismes pathogens (des
virus, des bactéries, des parasites) dont le potentiel de danger sur la
santé humaine varie pour chaque genre, et limite donc les usages que Von
peut faire de l'eau (baignade, élevage de coquillage).
· Prélèvement de l'eau
Au niveau de chaque station, un prélèvement
d'eau en surface a été effectué pour :
l'analyse bactériologique, a l'aide des flacons en
verre préalablement stérilisées de 500
ml. Un étiquetage précis est élaboré pour une
aisance reconnaissance des stations avant le remplissage des flacons.
Le prélèvement est
effectué a une profondeur de 15 a 30 cm sous la surface
d'eau. Tous les échantillons sont ensuite conservés dans une
glaciere transportable pour des analyses ultérieures au laboratoire.
Dans notre étude nous avons opté pour la
méthode de filtration sur membrane pour estimer la charge
bactérienne dans la zone d'étude. C'est la méthode de
concentration la plus utilisée au laboratoire, pour sa facilité
et sa reproductibilité. Elle consiste en une filtration de l'eau sur des
membranes de porosité 0,45gm susceptibles de retenir les
bactéries avec un quadrillage en surface facilitant les
dénombrements.
a) Materiel :
L'appareil est un simple système de filtration de
marque Sortius fonctionnant sous pression reduite (pompe a vide), il contient
un support a filtre qui reçoit la membrane de filtration et un flacon
pour recuperer l'eau filtree. Les membranes utilisees sont de marque millipore
avec un diamètre de 0 ,451.um.
Figure 111.28 : Dispositif de l'appareil de filtration sur
membrane.
b) Mode operatoire : Devant un bec-bunsen et sur une paillasse
javellisee.
1. Lavage et sterilisation de l'equipement de filtration pour
flambage et mise en place de la pompe a vide.
2. Prendre une membrane filtrante sterile pres du bord a l'aide
d'une pince sterilisee par flambage a la flamme et la deposer sur le support du
filtre.
3. Placer l'entonnoir sur le support et le
fixer fermement verser dans chaque entonnoir un volume 100ml
de l'echantillon bien homogeneise.
4. Faire le vide jusqu'a filtration totale de l'echantillon.
5. Retirer l'entonnoir et deposer la membrane
filtrante a l'aide d'une pince sterile sur un milieu adapte bacteries
recherchees.
6. Deposer la membrane en la deroulant pour tenir un contact
etroit avec la gelose (la presence de bulles d'air est signalee par des taches
blanches)
7. Inscrire sur la boite de Petri le numero de l'echantillon et
la date de filtration.
8. Placer les boites de Petrie en position inverse une dure
specifique pour chaque germe.
9. Flambage du dispositif par le bec-benzène après
chaque échantillon filtré, afin d'éviter toute
contamination possible.
4-1. Dénombrement des Coliformes totaux et
Coliformes Meaux :
Un volume de 50ml d'échantillon a été
aré, la membrane est déposée sur un milieu
gélosé sélectif Tergitol. L'opération est
répétée deux fois .L'une des boites est incubée a
37°c pendant 24-48h pour la recherche des coliformes totaux, et l'autre a
44°c pour la recherche des coliformes fécaux.
Lecture :
-pour les coliformes totaux :
Après la durée d'incubation, les boites de
Pétri sont retirées de l'étuve, et sur une paillasse
javellisé devant un bec-bunsen, on compte les colonies rouges et
jaunes.
-pour les coliformes Meaux :
Après la durée d'incubation, on dénombre
uniquement les colonies jaunes typiques
24-48 a 37°C (CT)
24-48 a 44°C(CF)
~époser la membrane sur la boite de Pétrie
Les filtres
Tergitol
Colonies jaunes, rouges Colonies orange avec halo orange
Figure III ;29: Technique de dénombrement des coliformes.
(UFC/100ml).
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