Conduite à tenir devant un LCR (Liquide Céphalo- Rachidien ) purulent

République Algérienne Démocratique et Populaire
Ministère de la Santé de la Population et la Réforme
Hospitalière

Présen

TANFOUR IBTISSEM Mr AITKACI MEHYEDINE

Promotion

2008-2011

Que les gens qui ont contribué de prés ou de loin a

l'élaboration de ce mémoire soient chaleureusement

remerciés pour l'aide apporté.

Mes remerciements iront a monsieur.
·

*LOUAHCHE AMMAR .. directeur de l'école

paramédicale de skikda

*SOLTANE HAMEIDA .. directeur des études

*HAIOUL SALIM : chef d'option laboratoire

*RACHED AMMAR . professeur de biochimie

*AIT KACI MAHIE DINE . professeur de

hématologie

*LAIBE MOHAMED . professeur de parasitologie

Ainsi qu'a M^me Hamitouche Nora bibliothécaire de

l'école

Au personnel du laboratoire des différents secteurs sanitaires de Skikda et plus
particulièrement a « NASSIMA REKIOUA ))qui nous a prêté main forte et sans
qui ce travail n'aurait pu être concu.

Je dédie le présent travaille aux personnes qui m'ont prodiguée de précieux conseils tout au long de ma formation et durant toute la période consacré a l'élaboration de mon mémoire de fin d'étude. Mes remercIments iront a mes chers parents, mes soeurs et frères, mon beau frère Mohamed, a mes nièces et neveux : Reda, Ramy, Abd el-raouf ,Walid, Nidale Eddine, Rym et Aridje .

Ainsi qu'a mes amies ; Lamia, Hafida, Sabah, Samir, Khadar, Hamza et tout
particulièrement a Hlimou,

Enfin les personnes que je n'ai pas citées m'excusent de cette omission.

A Walid et Nawal ; mes chers frères et amis

Conduit a tenir devant un LCR purulent

SOMMAIRE

·

1

. Introduction........................................................................3

· . Problématique................................................... 6

· . Hypothèse..................................................................... 7

Partie théorique

Chapitre 1: DEFINITIONS

1.	définition des concepts.......................................................	8
2.	LCR: composition et role....................................................	9
3.	Les différentes méningites rencontrées...............................	10
4.	La méningite purulente....................................................	12
a)	Définition.....................................................................	12		b)
Le spectre des agents possibles........................................	12

Chapitre 2: ETUDE BIOLOGIQUE

1. L'examen cytobactériologique du LCR..............................14

2. La cytologie du liquide purulent................................. 17

3. La cytologie du liquide trouble 17

Partie pratique

Chapitre 1:

1. Méthodologie de la recherche......................................18

1' Objectif de la recherche.............................................18

a. Objectif général.......................................................18

b.	Objectif spécifique......................................................	18
2.	Lieu de l'enquête........................................................	18
3.	Population cible................................................	...19
4.	Outil de l'enquête......................................................	19
5.	Echantillonnage.......................................................	20

Chapitre 2

1. Recueil des donnés et interprétation des résultats.........21

a) recueil des donnés...................................................21

b) analyse et interprétation des résultats........................32

2. discussion et vérification des hypotheses ...................36

+ Conclusion....37

+ Annexe..38

Conduit a tenir devant un LCR purulent

Introduction

3

Le liquide céphalo-rachidien (LCR) occupe deux grands compartiments du système nerveux central :

/ Les ventricules cérébraux : dans les quels il est secrété par les plexus choroides

2/ Les espaces sous arachnoidiens cérébraux et spinales aux au niveau des quels il est résorbé par les villosités arachnoidiennes.

Ces deux compartiments communiquent librement par les trous de Magendie et de Lush Ka les ventricules cérébraux sont entièrement revétus par l'épendyme et les espaces sous arachnoidiens sont contenus dans les mailles des leptoméninges.

Le volume de LCR est chez l'adulte de 120 a 150 ml et ce volume est sécrété essentiellement au niveau des plexus choroides (formations qui fonctionnent comme les glomérules latéraux). Les plexus choroides sont constitués par un stroma revétu d'un épithélium. Le stroma est fait de cellules leptoméninges (cellules piale) dispersées entre de très nombreux capillaires sanguins.

L'aspect de LCR est typiquement << eau de roche >>.

Diverses étiologies peuvent modifier cet aspect qui peut devenir :

- Hémorragique : il s'agit d'un accident de prélèvement ou soit une hémorragie méningée.

- Trouble : cette modification est provoquée par l'hyper leucocytose et tous les degrés existent depuis l'aspect opalescent jusqu'au classique aspect ^<<eau de riz^>> évocateur d'une méningite due à des germes pyogènes.

L'infection du système nerveux se manifeste généralement par une perturbation de la composition du LCR. les méningites sont plus fréquentes des infections du système nerveux se sont des inflammations des membranes qui entourent le cerveau et la moelle épinière ;peuvent être causer par des micro-organismes : bactéries, parasites, virus et champinions et peut être subdivisée en deux catégories

- méningites médicales : qui apparaissent comme primitives, sont en fait consécutive a une infection ORL ,on une infection généralisée de type septicémique .

- Méningite chirurgicale : post opératoire ou post traumatique dont les bactéries sont directement introduites par les lésions.

Dans l'une et l'autre éventualité, la présence de l'agent infectieux et a l'origine d'une inflammation de l'ensemble des formations qui contiennent le LCR.

L'examen du liquide céphalo-rachidien est un examen d'urgence médical qui nécessite des condition rigoureuses de toutes les étapes ;de prélèvement, transport, et manipulation.

Le diagnostic de la méningite purulente peut être confirmé ou infirmé rapidement grace a la cytologie et la formule cellulaire du LCR ,ainsi

que le diagnostic étiologique en se basant sur l'examen directe et la recherche des antigènes solubles, et par conséquent permet de choisir un

5

traitement mieux adapté dans les délai les plus courts sans attendre le résultat de la culture et de l'antibiogramme.

Le plus souvent responsable de méningites purulentes graves sont le pneumocoque, le méningocoque, Listeria monocytogenes et plus rarement Hemophilus influenzae. Les méningites purulentes à pneumocoques sont grevées d'une plus lourde mortalité (19%) que les méningites à N. meningitidis (13%) ou à H. influenzae (3%). Les sujets jeunes vivants en communauté sont particulièrement exposés. Pour les personnes vivant au contact d'un cas déclaré, on estime que le risque d'acquérir une méningite à méningocoque est 600 à 1000 fois plus élevé que dans la population générale du méme age. L'incidence des méningites à pneumocoques est estimée à 2/100000 dans les pays développés. Cependant, elle survient plus fréquemment chez l'adulte, et est plus souvent plus grave que les autres méningites purulentes, si bien qu'elle représente une large majorité des cas de méningite purulente justifiant la réanimation.

Conduit a tenir devant un LCR purulent

Problématique

L'aspect macroscopique du LCR suffit souvent a seul a poser un diagnostic et a instituer un traitement ;

- Un LCR trouble oriente vert les atteintes bactériennes.

- Un LCR purulent oriente vert une inflammation des méninges due a une bactérie dite pyogène.

La question qui se pose est :

Dans quelle limite cytologique (numération et type cellulaire) pouvonsnous distinguer l'aspect

Purulent de l'aspect trouble d'un LCR ?

Hypotheses

7

> L'aspect trouble du LCR est dü a la présence des globules blancs dans une limite de numération > 500 éléments /mm³ et au type cellulaire (GB polynucléaires.

> L'aspect purulent du LCR est dü a la limite de numération des globules blancs > 1000 éléments/mm³;

Et a la présence exclusive des GB neutrophiles altérés

Partie

théorique

Chapitre

1

Conduit a tenir devant un LCR purulent

8

1. definition des concepts

Aspect: manière dont qqn ou qqch se présente a la vue, a l'esprit.un château d' aspect imposant.

Cellulaire :adj .qui se rapporte ou qui appartient a la cellule .qui est constituer par des cellules. ⁽¹⁾

Cytologique :cytologie :S.F. Sience qui traite des cellules normales et pathologiques de leurs structures et de leurs fonctions.

Distinguer :V.Tconstituer l'element caracteristique qui differencie, separer la parole .distingue l'homme de l'animal.

Exclusive :adj.qui appartient a un seul par priolege special .la ppt exclusive d'un model .qui repousse tout ce qui et etranger.

GB :leucocytes :cellules nuclée du sang humain dont les diverses variétés jouent un role dans la defense contre les agents étrangers a l'organisme.globule blanc ^(2).

LCR : abreviation du ^<<liquide céphalo_rachidien^>>.ancienne denominatio du liquide cérébro_spinal ;liquide entourant tout le système nerveux central et remplissant également les cavités ventriculaires encéphalique. ⁽³⁾

Limite : ce qui marque le terme d'une étendue d'un territoire, terme d'une période

Limite d'age, degré ultime seuil infranchissable, etre a limite de ses forces.

Numeration : S.F. dénombrement des éléments figurés contenus dans un milieu biologique quelconque ^<<globulaire^>>.

Purulent: qui contient ou produit du pus, un furoncle⁽⁴⁾ .

Fyogène : qualifie une bactérie capable de provoquer une accumulation locale de polynucléaires neutrophiles altérées se traduisant par formation de pus. ⁽⁵⁾

Trouble :S.M. altération perturbation ,changement dans un sens morbide.

Type : ensemble de caractéristiques d'une catégorie model_ homme.

2. LCR: composition et role Composition

Le LCR normal est un liquide stérile, incolore leur constitution quantitative est proche de celle du sang:

· Les hématies = 0

· Les leucocytes <2 el/mm³

· pH= 7,32

· La densité est comprise entre 1,203 et 1,208

· Albumine =0,15 à 0,25 g/L

·

Le glucose = 0,5 à 0,60 g/L 60⁰/0 de la glycémie

· Chlorure=7,3g/L

· Le liquide est sterile à la culture

Lors de la pénétration de micro-organisme dans le LCR il perturbe sa composition et sa fonction.

Role:

· Mécanique, protection contre l'ondée sanguine et pression vasculaire, les chocs, (amortissement du déplacement du cerveau vers le crâne).

· Maintien de la régulation de la pression entre crânienne

· Milieu nourice

· Epuration

· Transport des éléments nutritifs des neurones

· Elimination des déchets des cellules du système nerveux central.

10

3. Les différentes méningites rencontrées

1 ) Les méningites purulentes :

a- D'origine bactérienne :

· Méningite à méningocoque : (Nesseria méningitidis) bactérie aérobie a gram négatif se présente sous la forme d'un diplocoque, en grain de café, oxydase et catalase positif.

· Méningite à pneumocoque : cocci a gram positif, responsable pneumonias d'otites et de méningites, il existe plus de 80 sérotypes en fonction de l'antigène polysaccharidique capsulaire.

· Méningite à streptocoque du groupe B : cocci a gram positif, responsable de l'infection néonatale transmise par la mère.

· Méningite à bacilles gram négatif : parmi les bacilles a gram négatif, Escherichia coli représente environ 40% des étiologies des méningites bactérienne du nouveau née dont une grande majorité est relie au sérotype K,.

· Autres germe responsables de la méningite purulente :

- Méningite a staphylococcus auréus.

- Méningite a hémophilus influenza (bacille a gram négatif

fragile)

· Méningite listerienne : les épidémies des le listériose s'observent chez le nouveau née est les femmes enceintes, les infections touche surtout les sujets âgés, les patients immunodéprimés.

Conduit a tenir devant un LCR purulent

12

b- D'origine parasitaire :

Les parasites retrouvés dans LCR :

- Amibes libre.

- Naegleria fowleri.

- Hartmannela.

- Acanth am oeba.

- Tripano somiases africaine.

- Toxoplasme.

- Plasmodium falciparum.

2) les méningites claires :

a- d'origine bactérienne :

· méningite tuberculose : elle est due à l'invasion des méninges par des bacilles de koch (BK) elle survient l'enfant au adulte jeune à la période secondaire du cycle de la tuberculose, c .à .d les mois qui survent la primo-infection.

b- d'origine virale :

· méningite virale : sont dues essentiellement aux E coli et coxsachie viras qui représentent à aux seules prés de 83% des viras isolés du LCR.

c- d'origine parasitaire :

· Mycoses:

- cryptococcus neoformans : dianpignon levuriforme capsulé

responsable d'une méningite afébrule favorisée par la diminution des défenses immunitaire.

- Candidat albicans : généralement retrouvées en France.

- Borrélioses : fièvre récurent à poux ou à tiques provoque une

réaction lymphocytaire s'accompagne d'une élévation de l'albumine.

4. La méningite purulente

a. Définition:

Une inflammation des méninges et du liquide-céphalo-rachidien qu'elle contient entre leur familles due à une bactérie dite pyogène.

b. Spectre des agents possibles:

Infection des méninges d'origine bactérienne

Le spectre des agents possibles dépond de l'environnement et de l'age Nourrisson: 01 mois E. coli streptocoque du drupe B Listeria

jeune enfant: Hemophelus influenza (en l'absence de vaccination) méningocoque ( 50 )pneumocoque .

adulte: pneumocoque ( 50 )méningocoque (30 )Neisseria méningitidis listeria (surtout chez personnes agées ou affaiblies) Staphlocoque pseudomonas aerogenas

Nessiria méningetidis (12 serogroupes )

Incidence 03-10/100000 plus fréquente chez les enfants

La méningite à méningocoque est ubiquitaire en particulier <la ceinture de méningites en Afrique centrale Arabie Saoudite Asie Amérique du sud)

Les épidémies sont souvent causées par le serogroupe A en Europe le plus souvent le serotype B et C

Jusqu'à 80 des maladies à méningocoque concernant des personnes 20ans.

paneteries généraux: l'infection (leucocytose, CRP, VS )

LCR : prélèvement par ponction après exclusion d'une hypertension intracrânienne précaution indispensable dans les suspicions. On

Méningite virale

Méningite bactérienne

Méningite tuberculeuse

Plusieurs milliers

Plusieurs
centaines

Plusieurs
centaines

Nombre de cellules

Conduit a tenir devant un LCR purulent

commence par l'aspect visuel du liquide , en suite 02 échantillons sont envoyer au labo le 1 er pour examen biologique ( glycorachie , protéines ,lactate ) et microscopique ( nombre et différenciation cellulaire préparation le gram et un bleu de méthylène )

le 2eme pour mise en évidence du germe , culture et recherche d'Ag , PCR , on conserve un 3eme échantillon ou frigo pour d'éventuelles autres analyses

Aspect visuel Trouble Claire Caillot en toile

d'araignée

Glucose <30mg/dl Normal <30mg/dl

lactate >3,5 m mol/l <3,5 m mol/l >3,5mmol/l

Le lactate du LCR est elevé et le glucose est baissé

(40 de la glycemie )dans les méningites bacteriennes au contraire des méningites viral (lactate et glucose normaux ) le LCR est trouble dans méningites bactériennes .

Type cellulaire Granulocyte Lymphocyte Lymphocyte

monocyte

Protéine >20mg/dl normal >120mg/dl

Chapitre

2

Conduit a tenir devant un LCR purulent

14

1. L'examen cytobactériologique du LCR

1) Examen direct et culture du lcr

a) Culture bactériologiques

· a effectuer en premier

· ensemencer en isolement a la pipette boutonnée 0.1 ml de LCR non centrifugé sur :

- une gélose au sang cuit (gélose « chocolat > supplémentée en

factures de croissance (hémine, nicotinamide adénine dinucléotide, vitamines...) qui sera incubée dans l'air contenant 5-10 de Co2

- un milieu anaérobie cystéine de Rosenow ou une gélose
Trypticase-Soja additionnée de 10 % de sang qui sera incubée sous

atmosphère anaérobie contenant 5 1 10 % de co2.

- Une gélose ordinaire.

Tous ces milieux seront incubés au minimum pendant 48 heures (au maximum 4 fours) a 37 C°.

b) Examen cytologiques

· Homogénéiser le LCR par agitation et introduire une goutte de liquide dans une cellule de Malassez recouverte d'une lamelle : pour facilitez l'identification des cellules , placer sur la lamelle une goutte de bleu de méthylène alcoolique saturé et laisser évaporer avant de recouvrir la cellule de Malassez.

· Dénombrer les hématies et les leucocytes par mm³ de liquide.

· Centrifuger le LCR restant et préparer des frottis a partir du culot de centrifugation.

· Colorer une frottis par le May-Grunwald Giemsa pour établir la formule leucocytaire.

· Colorer l'autre frottis par la méthode de gram et rechercher la présence de bactéries.

Conduit a tenir devant un LCR purulent

c) Examens biochimiques :

· Déterminer sur le surnageant de centrifugation la Glycorachie , la Protéinorachie et la Chlorurorachie.

d) Résultats a J O (transmettre en urgence)

· Leucocytorachie et formule leucocytaire.

· Présence ou absence de bactéries a l'examen direct.

· Si présence de bactéries , préciser leur morphologie > ( bacille ou coupe ) et leur affinité tinctotorial (gram positif ou gram négatif ).

· Glycorachie , protéinorachie et chlorurorachie.

2) Examen des cultures, Identification, Antibiogramme (a J I).

a) Lecture des cultures

L'orientation diagnostique sera sur :

- L'aspect des c colonies bactériennes.

- La morphologie et l'affinité tinctoriale des bactéries isolées

(bacilles ou coques, Gram positif ou négatif).

- Les exigences nutritionnelles des microorganismes.

- La présence ou l'absence d'une Cytochrome-Oxydase , d'une

catalase.

b) Ensemencement d'une galerie d'identification :

A partir des colonies isolées , effectuer les tests biochimiques d'identification appropriés . A titre indicatif pour les 3 espèces principales responsables de méningites (méningocoque , pneumocoque et hémophile) pratiquer les tests suivants :

> Pour le méningocoque :

- Etude du métabolisme glucidique : glucose (oxydation) , maltose

(oxydation) , saccharose ( par d'oxydation ).

16

- Groupage antigénique a l'aide d'immunsérums monovalents

spécifiques ;

> Pour l'hémophile :

- Exigence en hémine et nicotinamide adénine dinucléotide.

- Détermination du biotype : présence ou absence d'une uréase ,

d'une ornithine décarboxylase , production ou non d'indole , positivité ou négativité du test a a l'ONPG.

- Pour le pneumocoque :

- Sensibilité a l'optochine.

- Agglutination de particules de latex sensibilisées par un

immunsérum polyvalent anti S. Pneumonie.

c) Etude de l'activité des antibiotiques sur la couche isolée.

- a- titre indicatif tester l'activité de la pénicilline G, amoxycilline

(ou ampicilline), pipéracilline , céfotaxime ( ou latamoxef , ceftriaxone ) , chloramphénicol , Tri-méthoprime -sulfamethoxazole , gentamicine , tobramycine , amikacine , colistine , pefloxacine.

- Rechercher la présence d'une beta-lactamasse si une souche de

Haemophilus influenzae est isolée.

d) Résultats a J I

- Culture bactériologique.

- Orientation diagnostique.

e) La cytologie du liquide purulent

Aspect purulent

-Plus de 1000 élé/mm³

-Majorité des poly nucléaires neuyrophile (pnn) -Hypoglycorachie (rapport glycorachie /glycémie< 0,3)

17

-Hyperproteinorachie (souvent >a 1g/l)

NB:La formule leucocytaire initial d'un LCR de méningite purulente peut également panachée (formules mixte : equilibre entr polynucléaires dans 10% des cas

f) La cytologie du liquide trouble

-Aspect trouble

-Plus de 500 élé /mm³

-Majorité de polynucléaire neutrophile (pnn)

-Hypoglycorachie

-Hyperproteinorachie

Partie

pratique

1. Méthodologie de la recherche

Conduit a tenir devant un LCR purulent

18

Personnel		nombre		expérience
LDE		15		15_25ans
Microbiologistes		01		06 ans

1. Objectif de la recherche :

a) objectif général :

Ce travail consiste a connaitre les démarches a suivre pour effectuer l'analyse cytologique du liquide céphalorachidien (LCR) purulent et trouble.

b) objectif spécifique: Identifie la différance être l'aspect purulent et trouble de LCR

2. lieu de l'enquête

le lieu de l'enquête a été le laboratoire de l'EPH de Skikda (paillasse de bactériologie) durant les années 2009, 2010, 2011.

Le laboratoire est constitué de deux étages:

- Le 1^er étage comprend:

Une salle de reception, une salle de biochimie, une salle de bacteriologie une chambre de garde.

- le 2^eme etage comprend:02 paillasses d'hematologie, une paillasse de serologie, un bureau du chef service et le bureau du medecin chef.

3. population cible :

La population ciblée est constituée par les laborantins diplômés d'Etat (LDE), les microbiologistes et les biochimistes

Biochimistes

04

10_20ans

4. outil de l'enquête :

Pour la réalisation de l'étude, il a été choisi des outils adaptés au recueil des informations utiles a l'étude. Le questionnaire élaboré comporte des questions fermées et des questions semi ouvertes.

.

Conduit a tenir devant un LCR purulent

20

5. échantillonnages:

Nombre de Nombre de Nombre de qst

question question non récupéré

distribué récupéré

nbr	20	20	00
pourcentage	100%	100%	00

Représentation graphique des résultats globaux:

1. Recueil des donnés et interprétation des résultats

a. recueil des données :

Question 01:

1/ pouvez-vous préciser la principale étape dans le diagnostique de la méningite ?

repenses Nombre Pourcentage

L'examen 11 55

macroscopique

l'examen 2 10

microscopique

l'examen après culture 7 35

autres 00 00

Tableau 01:représente la répartition des repenses de la question01

autres

L'examen macroscopique

L'examen microscopique

L'examen apres culture

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Conduit a tenir devant un LCR purulent

oui

non

22

Question 02:

Est ce que la cytologie est suffisante pour rendre un resultat de ECB de LCR?

Réponses Nombre Pourcentage

oui 15 75

non 5 25

Tableau 02:représente la répartition des repenses de la question02

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Question 03:

Quels sont les caractéristiques de la démarche de l'examen de LCR ?

l'attention portée a l'acheminement de LCR au laboratoire

l'aspect du prélèvement

Réponses

le délai de l'exécution de la technique

Autres

Nombre	Pourcentage
17	85
3	15
00	00
00	00

Tableau 03:représente la répartition des repenses de la question03

Autres

l'attention portée a
l'acheminement de LCR
au laboratoire

le délai de l'exécution de

la technique

l'aspect du prélèvement

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Conduit a tenir devant un LCR purulent

oui

non

24

Question 04:

Est ce que vous confrontez les résultats de l'examen cytologique avec les Résultats de l'étude bactériologique ?

Réponses Nombre Pourcentage

oui 20 100

non 00 00

Tableau 04:représente la répartition des repenses de la question04 Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Question 05:

Quel est l'examen le plus fiable dans le diagnostique de la méningite purulente ?

Réponses Nombre Pourcentage

L'examen cytologique 10 50

L'examen 10 50

bactériologique

Autres 00 00

Tableau 05:représente la répartition des repenses de la question05

l'exmen cytologique l'examen bacteriologique Autres

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Conduit a tenir devant un LCR purulent

Question 06:

oui

non

26

Est ce qu'il est nécessaire toujours d'associer l'étude biochimique et bactériologique ?

Réponses Nombre Pourcentage

oui 11 55

non 9 45

Tableau 06:représente la répartition des repenses de la question06

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Question 07:

Est ce qu'on peut parler d'une méningite a méningocoque devant tout les méningites purulentes ?

Réponses Nombre Pourcentage

oui 00 00

non 20 100

Tableau 07:représente la répartition des repenses de la question07

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

oui

non

Question 08:

Conduit a tenir devant un LCR purulent

Nombre des éléments

((GB:PNN

Type de germe

Autres

28

Quel est l'agent principal qui provoque l'aspect purulent ?

Réponses Nombre Pourcentage

Nombre des éléments 00 00

(GB:PNN)

Type de germe 20 100

Autres 00 00

Tableau 08:représente la répartition des repenses de la question08

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Question 09:

couleur contenu autre

Quel est la différence entre l'aspect purulent et l'aspect trouble du LCR ?

Réponses Nombre Pourcentage

La couleur 1 1

Le contenue 19 99

Autres 00 00

Tableau 09:représente la répartition des repenses de la question09 Ce diagramme circulaire représente les résultats

Conduit a tenir devant un LCR purulent

Question 10:

Contaminations Manipulation Autres

30

Quel sont les anomalies a éviter dans l'analyse de LCR ?

Réponses Nombre Pourcentage

Contaminations 12 20

Manipulation 8 80

Autres 00 00

Tableau 10:représente la répartition des repenses de la question10

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Question:11

oui

non

Est-ce que l'aspect trouble du LCR indique toujours que la méningite est bacterienne?

Réponses Nombre Pourcentage

oui 11 55

non 9 45

Tableau 11:représente la répartition des repenses de la question11

Ce diagramme circulaire représente les résultats:

Conduit a tenir devant un LCR purulent

32

b. analyse et interprétation des résultats

1/ pouvez-vous préciser la principale étape dans le diagnostique de la méningite ?

L'examen macroscopique

L'examen microscopique

L'examen après culture

Autre

Correspondant aux Hypotheses N°1et 2

2/Est ce que la cytologie est suffisante pour rendre un résultat de ECB de LCR?

Oui

Non

Correspondant aux Hypotheses N°1et 2

3/Quelles sont les caractéristiques de la démarche de l'examen de LCR?

L'attention portée a l'acheminement de LCR au laboratoire

Le délai de l'exécution de la technique

L'aspect du prélèvement

Autres

Le LCR doit impérativement être considéré comme prioritaire et exige

Une prompte attention de la part du personnel.

4/Est ce que vous confinez les résultats de l'examen cytologique avec les résultats de l'étude bactériologique?

Oui

Non

L'étude bactériologique complète l'étude cytologique et ils doivent donner un même résultat.

5/quel est l'examen le plus fiable dans le diagnostique de la méningite purulente?

L'examen cytologique

L'examen bactériologique

Autres

Correspondant aux Hypotheses N°1 et 2

Conduit a tenir devant un LCR purulent

34

6/est il est nécessaire de toujours associer l'étude biochimique et bactériologique?

Oui

Non

L'étude biochimique est essentielle au diagnostique et surtout au pronostic de la maladie.

7/est ce qu'on peut parler d'une méningite a méningocoque devant toutes les méningites purulentes?

Oui

Non

L'aspect purulent du LCR n'est pas suffisant dans la découverte du germe provoquant la méningite purulente

8/quel est l'agent principal qui provoque l'aspect purulent?

Nombre d'éléments (globules blancs polynucléaires).

Type de germe.

Autres.

Correspondant aux Hypotheses N°1 et 2

9/Quelle est la différence entre l'aspect purulent et l'aspect trouble du LCR?

La couleur.

Le contenue.

Autres.

La cytologie est l'examen différentiel dans la confirmation de l'aspect trouble a l'aspect purulent

10/quelles sont les anomalies a éviter dans l'analyse de LCR? Contaminations.

Manipulation.

Autres.

Connaitre les différentes étapes de l'ECB donne un résultat fiable d'un examen basé sur les normes.

11/Est ce que l'aspect trouble du LCR indique toujours que la méningite est bactérienne?

Oui

Non

l'aspect de LCR reste toujours un indicateur d'orientation.

Conduit a tenir devant un LCR purulent

36

1. Discussion et vérification des hypotheses:

Le recueil des réponses aux questions N° :2, 4, 5, 6,9 . Vérification

> Vise l'importance de l'examen cytologique dans la détection de la

méningite bactérienne.

. Discussion

D'apres les réponses de la majorité des laborantins ; l'examen cytologique, indispensable, est suffisant pour confirmer un processus infectieux des méninges.

Le recueil des réponses aux questions N° :1, 7, 10,11. . Vérification:

> Vise l'importance de bonnes pratiques de l'exécution de la

technique et sa fiabilité.

. Discussion:

Suivant les réponses des laborantins,ces derniers sont

conscients de leur responsabilité envers les produits pathologiques et les patients.

Conclusion

L'examen cytobactériologique d'un LCR doit être fait avec rigueur.

L'examen microscopique qui doit être fait dans les plus brefs delais, complété par la recherche des antigènes solubles et surtout l'acheminement convenable du LCR ; permet au clinicien a la fois de s'orienter vers un diagnostique correct en attendant les résultats de la culture.

L'étude des cellules du LCR ne représente qu'un domaine relativement limité de la cytologie pourtant cet examen est indispensable dans l'établissement du diagnostic des méningites.

Conduit a tenir devant un LCR purulent

Annexe

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Les Colorations usuelles :

Coloration au bleu de méthylène

C'est une coloration simple (un seul colorant).

Réaliser un frottis : déposer sur une lame, une goutte du culot de centrifugation, ou une goutte d'eau physiologique + une colonie de la culture bactérienne (qui doit être bien dilacérée dans l'eau

physiologique) ; puis a l'aide d'une anse de platine on étale la goutte par des mouvements cylindriques de l'intérieur vers l'extérieur (surface: 2cm/1cm).

Laisser sécher le frottis a l'air libre.

Fixer le frottis : par le méthanol (5min)

Ou par la chaleur (02 ou 03 légers passages sur la flamme. Faire recouvrir la lame par le bleu de méthylène.

Laisser en contact pendant une minute.

Rincer (laver) abondamment a l'eau de robinet.

Egoutter, sécher, ajouter une goutte d'huile d'émersion et observer au microscope optique au grossissement x 100.

Résultats:

Permet de repérer les bactéries, d'apprécier leurs morphologies, leurs dispositions, leur abondance.

Permet aussi de confirmer la nature des cellules d'accompagnement.

Mais elle nécessite souvent d'être complétée par une autre coloration comme la coloration de gram.

Coloration de Gram:

C'est une coloration fondamentale en bactériologie.

C'est une coloration différentielle (affinité tinctoriale) basée sur la perméabilité des parois bactériennes a l'alcool.

Réaliser et fixer le frottis de la même facon que précédemment. Etapes de la coloration:

Etape de coloration:

Couvrir le frottis avec une solution de violet de gentiane (cristal violet) et laisser agir une minute.

refeter l'excès de la coloration.

recouvrir la préparation de lugol (solution iodo-iodurée) et laisser agir une minute.

refeter l'excès du lugol.

Etape de décoloration :

recouvrir a l'alcool pendant 30 secondes. Laver a l'eau .

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Etape de recoloration :

recouvrir avec la fuschine diluée pendant 30 secondes. rejeter l'excès de la fuschine.

rincer abondamment, égoutter, sécher, examiner a l'émersion. Résultats :

Certaines bactéries après avoir fixé le violet ne sont pas décolorées par l'alcool, elles apparaissent alors colorées en violet, on dit qu'elles sont a ((Gram positif ».

d'autres sont décolorées par l'alcool, elles ne seraient pas visibles sans la coloration finale par la fuschine qui les teinte en rose, on les dit a ((Gram négatif ».

ce cartactère est essentiel pour identification des bactéries en catégories : bactéries a Gram +et bactéries a Gram -

a) Coloration de May Grunwald Gièmsa (MGG):

. INTERET.

La method de may grunwald Gemsa (M.G.G) permet la coloration des plaquettes, hématies et leucocytes afin d'établir le pourcentage des différents, types .

. PRINCIPE.

Cette méthode es basée sur l'emploi successif de deux colorants May Grunwald et Giemsa : le premier fixe le frottis par son alcool éthylique et colore l'élément acidophile ainsi que les granulations spécifique des leucocytes.

Second colore surtout les noyaux et les paroies aziophiles .

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Conduit a tenir devant un LCR purulent

· MATERIELS ET REACTIFS

- Eprouvettes et portoirs ;

- Eau distillée et sèche lames;

- Solution de Giemsa (diluée au un dixiémé (1/10) ).

· TECHNIQUE

- Poser la lame sur un support horizontal;

- Couvrir avec la solution de May Grunwald;

- Laisser agir trois minutes (3iin) ;

- Egoutter bien la lame;

- Recouvrir la frottis avec la solution de Giemsa ( duluée au 1/10^e)

- Laisser agir pendant 20minutes (20mn) ;

- Rincer la lame avec de l'eau distillée (H2OD) ;

- Laisser le frottis sur le portoir sécher à l'air ;

- Faire la lecture du frottis au microscope avec objectif à

immersion.

· RESULTATS .

Les noyaux sont rouge - violet (basichromatine ) et rose (Oxychromatine ) ;

Les cytoplasmes basophiles varient du bleu ciel au bleu foncé

Les cytoplasme poly chromât ophiles sot grisâtres avec des zones rosées et d'............ ;

Les granulations neutrophiles sont marron, rose sole;

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Les granulations basophiles (éosinophiles) sont orangées ;

Les granulations basophiles (métachromatique) sont violet foncé ; Les granulations azurophiles sont pourpre ou violet pourpre ; Les granulations basophiles des érythrocytes sont bleu cobaltes.

Il faut savoir que ces couleurs peuvent être altérées, soit par le vieillissement soit par la mauvaise qualité des colorants, soit par l'emploi d'eau trop acide ; au trop alcaline.

On ne voit pas par cette coloration, les mitochondries ni les centrioles. Le centrosome est incolore, ce qui permet de le localiser lorsque le cytoplasme est franchement coloré.

Conduit a tenir devant un LCR purulent

Questionnaire

1/ pouvez-vous préciser la principale étape dans le diagnostique de la méningite ?

L'examen macroscopique L'examen microscopique L'examen après culture Autre

2/Est ce que la cytologie est suffisante pour rendre un résultat de ECB de LCR?

Oui

Non

3/Quels sont les caractéristiques de la démarche de l'examen de LCR? L'attention portée a l'acheminement de LCR au laboratoire

Le délai de l'exécution de la technique

L'aspect du prélèvement

Autres

4/Est ce que vous confinez les résultats de l'examen cytologique avec les résultats de l'étude bactériologique?

Oui

Non

5/quel est l'examen le plus fiable dans le diagnostique de la méningite purulente?

L'examen cytologique

L'examen bactériologique

Autres

6/est ce qu'il est nécessaire toujours d'associer l'étude biochimique et bactériologique?

Oui
Non

7/est ce qu'on peut parler d'une méningite a méningocoque devant tout

les méningites purulentes?

Oui Non

8/quel est l'agent principal qui provoque l'aspect purulent? Nombre des éléments (globules blancs polynucléaires). Type de germe.

Autres.

9/Quel est la différence entre l'aspect purulent et l'aspect trouble du LCR?

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La couleur. Le contenue. Autres.

Conduit a tenir devant un LCR purulent

1O/quel sont les anomalies a éviter dans l'analyse de LCR? Contaminations.

Manipulation.

Autres.

11/Est ce que l'aspect trouble du LCR indique toujours que la méningite est bactérienne?

Oui

Non

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Conduit a tenir devant un LCR purulent

Marenne 2008, ISBN: 978_

8041_5686_2.

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BEBLIOGRAPHIE:

· La Rousse Médicale 2003.

· Dictionnaire Médicale, Jaques Quevauvillier 5éme édition, 2007

· Bacteriofiches, J_L. Fauchére, edition marketing 1990, éditeur des préparations grandes, école médecine 32, rue Bargue 75015 Paris France.

· Cytologie du liquide céphalo-rachidien Jaque Diebold 2004 ISBN: 2__84299_640_2, ISSN:1623_044 2.

· Maladies infectieuses ; Collection Med_line, Xavier Aglaret et Emanuel Wortier édition 2001 2002.

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· Médecine interne(le guide de l'interne), Gerd Herold,3^eme édition, traduction de l'édition Allemande par Fréderic Marenne et Anne