Mise au point d'une technique de dosage de l'activité de la catalase dans les tissus

MISE AU POINT DU DOSAGE DE L'ACTIVITE DE LA
CATALASE DANS LES TISSUS.

Guy NYA NJOMEN¹, Salim BENSAID² et Christophe SOULAGE²

1- GEMS, Animal Physiology Laboratory, Faculty of Sciences, University of Yaounde I, P.O. Box 8127, Cameroon

2- INSERM, U870, F-69008 ; INRA, U1235, F-69008 ; INSA-Lyon, RMND, F-69621 ; Univ Lyon 1, F-69003 ; Hospices Civils de Lyon, F-69003, Lyon, France.

I- PRINCIPE

La catalase dégrade le peroxyde d'hydrogine (H2O2) en eau et dioxygène suivant la réaction :

H2O2 2H2O + O2

La disparition du peroxyde d'hydrogène peut etre mesurée en spectrophotométrie.

II- DOSAGE SPECTROPHOTOMETRIQUE DE H2O2

DO

3,4

2,9 2,4 1,9 1,4 0,9 0,4 -0,1 -0,6

190 240 290

X,, nm

Figure 1: Spectre d'absorption du _H2O2 mesuré à l'aide d'un spectrophotom~tre KONTRON UVIKON 932.

H2O2 absorbe dans l'ultraviolet. La longueur d'onde traditionnellement utilisée pour doser H2O2 en spectrophotométrie est 240 nm (Beer & Sizer, 1959, Aebi et al, 1984). En conséquence, toutes les mesures seron,t réalisées dans des cuves en quartz.

II-1 Méthode de mesure.

L'absorbance est mesurée à 240 nm à l'aide d'un spectrophotomètre KONTRON UVIKON 932. Avant la mesure, deux cuves remplies chacune de 1250 mL de milieu réactionnel (MR) permettent de faire le blanc; l'une des deux sera conservée et servira à la mesure de l'absorbance des cuves échantillons. Le tableau de remplissage des cuves échantillon contenant du _H2O2 dilué à 1/200 est le suivant :

1

Volume de H2O2 (DL)	MR (DL)	Volume final (DL)
50	1200	1250
100	1150	1250
150	1100	1250
200	1050	1250

II-2 Résultats

y = 0,0523x - 0,0129 R²= 0,9965

A 240 nm

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0

0 2 4 6 8 10 12

H2O2, mM

Figure 2 Gamme étalon en H2O2

II-3 Conclusion :

L'absorbance à 240 nm est bien proportionnelle à la concentration en _H2O2 , donc la disparition d'H2O2 peut être suivie à 240nm.