3.1 PRODUITS
· Eau distillé
· Echantillon requis : sérum ou plasma recueilli sur
héparine
· Réactif : R se compose de :
Tampon pipe, PH 6.7 50 mmol/L
Phénol 24 mmol/L
Cholate de sodium 05 mmol/L
Amino-4-antipyrine 0.5 mmol/L
Cholestérol estérase = 180 U/L
Cholestérol oxydase = 200 U/L Peroxydase
= 1000 U/L
· Réactif standard se compose de :
Cholestérol bovin 2 g/L
3.2 TECHNIQUE
> L'échantillon requis est le sérum ou plasma
recueilli sur héparine ou EDTA de patient à jeun ; > Dans la
mesure du cholestérol, il y'a deux réactifs : le réactif R
et le réactif Standard.
> Le réactif R peut être utilisé sur la
plupart des automates, semi automate et en méthode manuelle.
Sa longueur d'onde est de 500 nm.
Température : 37°C
Zéro de l'appareil : blanc réactif
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BLANC
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STANDARD
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DOSAGE
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Réactif R
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300 uL
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300 uL
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300 uL
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Eau distilée
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3 uL
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-
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Standard
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-
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3 uL
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Echantilon
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3uL
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> On mélange et on lit les absorbances (A)
après 325 secondes d'incubation ; > Pour le calcule du taux de
cholestérol, on suit la formule suivante : A dosage
A standard X n
4. L'UREE
L'urée est une substance azotée produite à
partir des protéines alimentaires ou constitutives de l'organisme,
l'urine contient en moyenne 18 a 22g d'urée.
Le taux d'urée dépend de la fonction
rénale, des apports alimentaires en protéines, de l'état
d'hydratation. L'augmentation de son taux dans le sang est
généralement liée à une altération
rénale.
- Les Valeurs normales d'urée
Homme : 3 à 7.5 mmol/l soit 0.18 à 0.45 g/l Femme
: 2.5 à 7 mmol/l soit 0.15 à 0.42 g/l
4.1 PRINCIPE
L'urée est dosée en cinétique selon la
réaction suivante :
Urée + H2O 2 NH3 + CO2
Les ions ammonium, en présence de salicylate et
d'hypochlorite de sodium réagissent en formant un composé de
couleur verte dont l'intensité est proportionnelle à la
concentration en urée.
4.2 MATERIELS
· Tubes secs hépariné
· Centrifugeuse
· Spectrophotomètre
4.3 REACTIFS
· 1CC = 1 ml de réactif Urée R1 ;
· Sérum humain ;
· 1 CC de réactif de Glucose R2 ;
· 10 ul d'étalon standard ;
4.4 METHODE
> Le patient doit être à jeun avant de faire un
prélèvement sanguin ;
> On prend trois tubes après centrifugation : le
blanc, contient 1CC de réactif d'urée R1, 10 ul d'étalon+
1CC de réactif urée R1 ;
> On prend 10 ul de sérum + 1CC de réactif + R1
;
> Après un quart d'heure, on ajoute R2 dans les trois
tubes b, e, s ;
> la couleur devient verte ;
> On ajuste le zéro du spectrophotomètre sur le
blanc réactif ;
> Après un quart d'heure, on procède à
la lecture par le spectrophotomètre ;
> Après la lecture des résultats par
l'appareil, on termine par un rinçage à l'eau
distillée.
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