2- Méthode d'étude
Notre étude est une étude prospective qui s'est
déroulé du 03 août au 12octobre 2009 au laboratoire de la
Clinique Polyvalente MAHOUNA.
2-1- Population d'étude
L'étude a porté sur des sujets
diabétiques adultes sans distinction de sexe, de race et d'ethnie. La
méthode d'échantillonnage utilisée est un
échantillonnage systématique de tous les patients suivi à
la Clinique Polyvalente MAHOUNA. On a dosé chez ces patients la
glycémie et l'hémoglobine glyquée.
Notre échantillonnage s'est arrêté à
trente échantillons de sang obtenus par prélèvement
veineux.
2-2- Réalisation du dosage de
l'hémoglobine glyquée
2-2-1 Réactifs
Anticorps-latex :
Anticorps monoclonal de souris spécifique de
l'hémoglobine A1c adsorbé sur les particules du latex. Anticorps
latex à 2,5% (m/V) dans un tampon glycine 10mMol, ingrédients non
réactif à 16% (m/V) (10 uL, état sec dans chaque cartouche
de réactif). Agglutinants : polymère poly (acide
aspartique) à 0,005% (m/V) lié par des liaisons de covalence
à l'haptène de l'HbA1c dans un tampon citrate de sodium 20mMol
contenant de l'albumine sérique bovine à 0,1%
(m/V) et des ingrédients non réactifs à 1% ( m/V) (10uL,
état sec dans chaque cartouche)
Oxydant : ferricyanure de potassium à
1,5% (m/V) dans de l'eau avec des ingrédients non réactifs
à 1% (m/V) (10mL, état sec dans chaque cartouche).
2-2-2- Prélèvements
L'échantillon de sang est obtenu par
prélèvement veineux sur un tube EDTA. Le sang total
conservé sur EDTA peut être stocké pendant une semaine
à 25°c.
2-2- 3- Principe du dosage
La concentration spécifique en HbA1c et la
concentration en Hb total sont mesurées séparément. Le
rapport est exprimé sous forme de pourcentage de l'HbA1c. Pour le dosage
de l'Hb total on utilise le ferricyanure de potassium pour oxyder l'Hb de
l'échantillon en méthémoglobine. Cette dernière se
fixe alors au thiocyanate et forme un complexe associant thiocyanate et
méthémoglobine. C'est ce complexe qui est mesuré.
L'augmentation de l'intensité de la coloration à 531 nm est
proportionnelle à la concentration en Hb totale dans
l'échantillon.
Pour le dosage spécifique de l'HbA1c, on utilise une
méthode d'inhibition de l'agglutination sur latex (figure 2).
Un agglutinant (polymère synthétique contenant
des copies multiples de la partie immuno réactive de l'HbA1c) provoque
l'agglutination au latex recouvert d'un Anticorps monoclonal de souris
spécifique de l'HbA1c. Cette réaction d'agglutination entraine
une diffusion de la lumière plus importante qui se traduit par une
augmentation de l'absorbance à 531 nm. Les molécules d'HbA1c
présentes dans l'échantillon de sang total entrent alors en
compétition pour se fixer sur les sites de liaison des complexes Ac
latex dont le nombre est limité entrainant ainsi une inhibition de
l'agglutination et une diminution de la diffusion de la lumière. Cette
diminution peut être mesurée. Elle correspond à une
diminution de l'absorbance à 531 nm. La concentration en HbA1c est alors
quantifiée à l'aide d'une courbe d'étalonnage de
l'absorbance établie par rapport à la concentration en HbA1c.
Le pourcentage de l'HbA1c dans l'échantillon est
calculé de la manière suivante :
[HbA1c]<100
HbA1c (%) = [hernogiobine totale]
Principe du dosage
Anticorps- latex ?
??? Diffusion élevée (augmentation
de l'absorbance)
Agglutinant Agglutination
? ? ?
?
? Hémoglobine A1c dans le sang du
patient?
. Diffusion faible
(Diminution de l'absorbance)
Inhibition ?
Agglutination inhibée
Figure2
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