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Bioconversion enzymatique des composés phénoliques des effluents issus de l'extraction d'huile d'olive: une voie prometteuse de valorisation par la production de l'hydroxytyrosol naturel

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par Manel HAMZA KARRAY
Université de Sfax école nationale d'ingénieurs de Sfax - Doctorat en biologie 2013
  

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II-6 Extraction des composés phénoliques à partir des margines

L'extraction liquide-liquide des composés phénoliques est adoptée par l'acétate d'éthyle. Les échantillons des margines sont mélangés avec l'acétate d'éthyle (V/V). Le mélange est vigoureusement agité et centrifugé à 3000 tours/min pendant 5 minutes. La phase

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Matériel et Méthodes

organique est séparée et filtrée par une seringue à filtre (0,45 uM). Le filtrat est analysé directement par CLHP pour une détermination qualitative et quantitative des composés phénoliques.

II-7 Analyse par Chromatographie liquide à haute performance : CLHP

II.7.1. Analyse des monomères phénoliques

Le suivi de la concentration des molécules de monomères phénoliques contenus dans les margines est réalisé par chromatographie liquide à haute performance (CLHP). Les composés sont identifiés et quantifiés par la comparaison du temps de rétention et des aires des pics avec des échantillons standards.

II.7.2. Analyse des masses moléculaires de polyphénols

Le suivi de la variation des masses moléculaires de polyphénols contenus dans les margines est réalisé par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) en utilisant une colonne TSK-G2000 S-W-Supelco de longueur égale à 300 mm et de diamètre intérieur de 7,5 mm avec un débit de 0,6 ml/mn. La chaîne utilisée est de type Shimadzu. Elle comprend :

- Une pompe de type «LC-6A»;

- Un détecteur de type «UV-SPP-6AV» fixé à une longueur d'onde égale à 280 nm; - Un intégrateur de type «CR-6A»;

- Un injecteur de type «Rhéodyne 7125».

Comme phase mobile nous avons utilisé le tampon phosphate 0,1 M à pH 6,8. Ce tampon contient 0,5 g/l de NaN3 (conservateur) et 0,1 M de Na2SO4 (déshydratant). Le débit est de 1 ml/min. Avant l'injection, l'échantillon est filtré sur membrane « Millipore » de 0,45 ìm, puis dégazé sous l'hélium. Les composés aromatiques sont détectés à une longueur d'onde de 280 nm moyennant un détecteur UV (Shimadzu class-VP).

II-8 Détermination de l'activité antiradicalaire

II-8-1 Principe de la méthode

Cette méthode met en oeuvre un radical stable : 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl radical (DPPH). Ce radical peut fixer un (H°) arraché à l'antioxydant (AH). Il perd alors son absorbance à 520 nm et on calcule, après établissement de l'état stationnaire de la réaction, la quantité d'antioxydant nécessaire pour faire disparaître 50 % du DPPH (Brand-Williams et al., 1995). L'avantage de ce test est d'être rapide (2 à 6 heures) et de ne nécessiter aucune condition drastique.

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Matériel et Méthodes

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