II-3 Bioconversion de la margine
II-3-1 Méthode de la biotransformation
Le test de la bioconversion des margines sont
étudiés en utilisant le mycélium d'Aspergillus niger
(ou pelotes), filtrat de culture et le jus de culture entier
(mycélium et le milieu extracellulaire).
II-3-2 Détermination du pH et de température
optimaux
L'effet de la température sur l'activité
3-glucosidase et l'efficacité de la biotransformation est
déterminée par l'examen de son activité sur son substrat
spécifique pNPG et sur la margine à pH 4,8 à
différentes températures, à savoir de la
température ambiante (25°C) jusqu'à 100°C.
L'effet du pH sur l'activité 3-glucosidase et
l'efficacité de la biotransformation est déterminée par
l'essai de son activité à 50 °C à différents
pH (de 4,0 à 8,0). Des solutions tampon citrate (50 mM) sont
préparés à différents pH (de 4,0 à 8,0) afin
d'évaluer le comportement de l'enzyme dans la bioconversion des
margines.
II-3-3 Effet du volume de margine
Différents volume de margines sont testés dans
la bioconversion afin de chercher l'optimum de la bioconversion. En effet, des
ratios de volume de margine / volume d'enzyme allant de 0,5 à 10 sont
également testés.
II-3-4 Effet de la quantité de l'enzyme
La quantité de l'enzyme utilisée a
été échangée de 40 UI à 9000 UI afin de
chercher l'optimum de la biotransformation.
II-3-5 Effet de l'agitation
La biotransformation a été évaluée
à deux différentes conditions à savoir la condition
statique et la condition agité. Cette dernière condition à
été menée à l'aide d'un réacteur adiabatique
à double paroi moyennant un agitateur magnétique.
II-3-6 Cinétique de la bioconversion
L'effet du temps de contact entre l'enzyme et les margine a
été aussi testé. Une cinétique de la bioconversion
est effectuée. Le temps de la réaction a varié de 15
minutes à 24 heures. Un contrôle est incubé par l'ajout de
l'eau à la place de l'enzyme. Les échantillons sont
réservés périodiquement à partir du milieu de la
biotransformation pour les analyses ultérieures.
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Matériel et Méthodes
II-3-7 Bioconversion à grande échelle
Les réactions de bioconversion ont été
menées dans un réacteur et un réservoir fixe en acier
inoxydable dans des conditions optimales (Hamza, Khoufi & Sayadi 2012, a).
Pour la grande échelle de cette réaction de bioconversion 15 L de
deux types de OMW, (MCC: Margine Chaine Continuer et MSP: margine superbe
Press, qui sont fabriqués à partir moulin Sfax) ont
été effectuées dans un réacteur fermé
"Biolift 20 L" . Cependant, 40 L de margines du Nord Tunisien ont
été biotransformé dans un réservoir fixe
inoxydable. Ces margines fraîchement recueillie ont été
traitée avec la 3-glucosidase de concentration 500 UI/mL de milieu
réactionnel. L'enzyme 3-glucosidase a été obtenue suite
à la fermentation d'A. niger dans un fermenteur de 100 L durant
7 jours dans un milieu de culture enrichi par le son de blé. La
réaction enzymatique se déroule dans un réacteur
discontinu pilotée à 50 ° C pendant 120 min. La
quantité de produit hydroxytyrosol et l'activité enzymatique
residuel ont été déterminés au moment du
déroulement de la réaction. Après
bioprocédés, chacun sortes de margines sont collectées
dans des tanks et conservés à 4 °C jusqu'à la
séparation et la purification par des technologies membranaires.
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