I-6 Conditions opératoires de la préculture
d'A. niger
Le fermenteur Biolafitle de volume total 20 litres a
été utilisé pour lancer la préculture d' A.
niger avec un volume utile de 7 litres. Des spores d'A. niger
collecté stérilement à partir du milieu solide PDA
sont inoculés à raison de 6 108 spores/ml. Le pH de la
préculture est de 4,5. La température de la préculture est
de 30°C. L'agitation est de 300 tours/min. La durée de la
fermentation est de 5 à 7 jours et le volume d'air injecté est de
4 litres/min.
I-7 Conditions opératoires de la culture d'A.
niger
Le fermenteur Biotron de volume total 100 litres a
été utilisé pour lancer la culture d'A. niger
avec un volume utile de 40 litres. Le pH de la culture est de 4. La
température de la culture est de 30°C. L'agitation est de 200
tours/min. La durée de la fermentation est de 5 à 7 jours et le
volume d'air injecté est de 18 litres/min.
I-8 Chromatographie liquide à haute performance
(CLHP)
La chaîne CLHP utilisée est de type «
Shimadzu ». Elle comprend une pompe de type « LC-6A », un
détecteur de type « UV-SPD-6AV » fixé à une
longueur d'onde égale à 280
Matériel et Méthodes
nm, un intégrateur de type « CR-6A » et un
injecteur de type « Rhéodyne 7125 ». L'éluant
utilisé est un gradient de deux solutions : A (H3PO4; 0,1%) et B
(acétonitrile-eau; 7/3, V/V). pendant 20 minutes, la proportion de la
solution B augmente linéairement en passant de 20 % à 50 %. Cette
dernière proportion de (B) est maintenue constante pendant 10 minutes
puis elle augmente linéairement pour atteindre 80 % pendant 10 minutes.
Enfin, la proportion de (B) diminue jusqu'à 20 % au bout de 1à
minutes. Après filtration sur filtre 0,2 um, 20 ul de
l'échantillon à analysé sont injectés dans une
colonne de type « VP-ODS » de diamètre intérieur 4,6 mm
et de longueur 25 cm. Le débit utilisé est égale à
0,5 ml/min.
J-9 Chromatographie liquide à haute
performance couplée à la spectrométrie de masse
(CLHP-SM)
Le système CLHP utilisé est de type « Water
». Il est constitué par une pompe « 600 E » et par un
détecteur UV de type « Merck-Hitachi L-4000 UV detector ». La
colonne employée est la même que celle utilisé dans la
CLHP-UV. L'appareil (SM) est de type « Finnigan-MAT LCQ ».
L'ionisation adoptée est une ionisation chimique par protonation. La
température du vaporisateur est égale à 450 °C et
celle du capillaire est de 150 °C.
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