II- METHODES
II-1- TECHNIQUE DE PREPARATION DE LA GELOSE
CHOCOLAT
II-1-1- A partir du trypcase-soja et de
l'hémoglobine en granulées
La gélose trypcase-soja est utilisée à
double concentration.
-Mettre en suspension 16g de la gélose TSA dans 200mL
d'eau distillée dans une casserole et bien
homogénéiser.
-Chauffer à l'aide de la flamme du bec bunsen
jusqu'à la dissolution complète en agitant fréquemment
avec une baguette.
-Laisser bouillir 1 à 2 minutes.
-Repartir la solution dans des flacons stériles.
-Mettre en suspension dans un flacon stérile 4g
d'hémoglobine en granulées soluble dans 200mL d'eau
distillée. Mélanger l'hémoglobine avec quelques
millilitres d'eau distillée jusqu'à l'obtention d'une pâte
lisse. Tout en mélangeant, ajouter progressivement l'eau
distillée restante jusqu'à la formation d'une solution
homogène.
-Autoclaver les flacons à 121°C pendant 45 minutes
puis les ramenés à 50°C.
-Ajouter aseptiquement 200mL de la solution
d'hémoglobine, 4mL de polyvitex (soit 1mL de polyvitex pour 100mL de
milieu) à 200mL de la solution de base TSA.
-Mélanger délicatement, mais soigneusement pour
éviter la formation de bulles d'air dans la gélose (Faire de lent
mouvement de 8 sur la paillasse).
-Couler la gélose dans des boites de Pétri avec
une épaisseur de 4mm. -Laisser solidifier à la température
ambiante.
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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et
Jacques Fêmi SETONDJI
Utilisation comparée de la gélose chocolat
à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose
chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la
culture de trois espèces bactériennes méningées
-Emballer les boites coulées dans un papier aluminium et
conserver à 4°C pour une utilisation ultérieure.
II-1-2- A partir de la gélose trypcase-soja et du
sang de mouton défibriné
-Mettre en suspension 16g de la gélose TSA dans 400mL
d'eau distillée et bien homogénéiser.
-Chauffer à l'aide de la flamme du bec bunsen
jusqu'à dissolution complète en agitant fréquemment avec
une baguette.
-Laisser bouillir 1 à 2 minutes.
-Le répartir dans un flacon stérile.
-Autoclaver à 121°C pendant 45 minutes puis laisser
refroidir à 50°C. -Ajouter 20mL du sang de mouton
défibriné.
-Placer le mélange au bain-marie à 80°C
pendant 15 minutes tout en homogénéisant de temps en temps.
-Ramener à 50°C et ajouter 4mL de polyvitex.
-Mélanger les ingrédients en évitant la
formation de bulles d'air.
-Couler la gélose dans des boîtes de Pétri
avec une épaisseur de 4 mm. -Laisser solidifier à la
température ambiante.
-Emballer dans un papier aluminium et conserver à
4°C pour une utilisation ultérieure.
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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et
Jacques Fêmi SETONDJI
Utilisation comparée de la gélose chocolat
à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose
chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la
culture de trois espèces bactériennes méningées
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