Le test à la résazurine, permet de contrôler
la stérilité des laits stérilisés UHT. Le potentiel
redox est la mesure du pouvoir oxydo-réducteur d'un milieu.
· Principe:
Le principe de la méthode se base sur l'évaluation
pas colorimétrie du potentiel redox d'un lait. La résazurine est
utilisée comme indicateur coloré, sensible aux changements de ce
potentiel.
L'évolution de la couleur de la résazurine suit
celle du potentiel redox du milieu, qui lui-même est dépondant de
l'activité microbienne de lait analysé.
Le changement de couleur de la résazurine suit
l'évolution moléculaire suivante :
Résazurine Résofurine
Hydroresofurine
Bleu Rose Blanc
Lait stérile douteux lait non
stérile
· Mode opératoire :
> Les briks prélevées, subissent un
étuvage pendant trois jours à 37°C avant le test; puis
transférées dans la salle de résazurine oü elles sont
classées selon le datage, horaire dans un ordre croissant et
aseptisés à l'alcool.
> Distribuer à l'aide d'une pipette appropriée
(20ul) de la solution de résazurine dans les puits des microplaques.
> Ajouter (200ul) du lait à tester.
> Incuber les microplaques à 37°C pendant 4
heures dans un etuve.
> Après l'étuvage contrôler la couleur du
lait, car le potentiel redox du lait est évalué par
colorimétrie, la résazurine est considérée comme un
indicateur coloré.
Rose Blanche
Forte présomption
de non stérilité Lait non
stérile
Bleue
Le lait est
Présumé
stérile
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· Expression des résultats :
(larpent.j.p, 1997) Les variations de la couleur du lait sont
contrôlées : v' Couleur bleue : le lait est présumé
stérile.
v' Couleur rose: forte présomption de non
stérilité. v' Couleur blanche: le lait est non stérile.
Brick de lait
Microplaque
200ul
20ul
Solution à la
résazurine
Incubation 4 h à37°C
Virage au rose ou
blanc le lait et non
«
Stérile »
Pas de virage le lait
est
«Stérile»
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Figure N°14 : Méthode à la
Résazurine (confirmation de la stérilité de produit
fini)
66
Remarque :
Préparation de la solution de résazurine
:
> Introduire dans un flacon stérile en verre :
· 50ml d'eau distillée stérile.
· Une pastille de résazurine à 2,5 mg.
· Agiter jusqu' a dissolution complète de la
pastille dans l'eau.
