Animaux
Les expériences ont étés
réalisées sur des rats femelles adultes de souche SpragueDawley
de 270g (témoins non gestantes), 370g (primipares) et 450g (multipares,
4 à 5 parturitions). Les rates gestantes ont été
accouplées chez le fournisseur (Charles River). Dans le laboratoire, les
animaux ont été gardés dans une pièce isolée
dédiée exclusivement aux femelles. Les animaux ont à leur
disposition de la nourriture et de l'eau en permanence, et sont maintenus une
animalerie thermostatée et dans laquelle la période
d'éclairement est de 1 2h.
Protocole expérimental
Quatre groupes expérimentaux (n=4 à 6) ont
été étudiés :
Les deux premiers groupes sont formées pas les rates
gestantes :
1. Rates primipares gestantes traités au RU-486 ( per
os - 5mg/kg dans une solution de carboxyl-méthyl-cellulose, 1ml/kg). Ce
traitement permet de synchroniser les naissances, elles ne sont pas
provoquées car elles ont eu lieu à terme. L'expérience est
alors envisageable car ainsi les mises bas sont regroupées dans une
période de quelques heures9. Trois sous-groupes ont
été formés pour étudier 4 périodes avant ou
après la mise bas:
· trois heures avant la mise bas (estimé)
· immédiatement après l'expulsion du premier
petit
· 2 heures après l'expulsion du premier petit
· 4 heures après l'expulsion du premier petit
trois groupes témoins existent également :
2. les rates témoins gestantes perfusées avant la
mise bas
3. et 4. deux lots de rates non gestantes de même
âge : traitées au RU-486 et traitées uniquement avec le
véhicule dans les conditions identiques.
J-2 1
Dans la matinée, on administre aux rates, par voie
orale, le RU-486, afin de synchroniser les naissances. Un groupe témoin
a été constitué afin de démontrer que cette
opération ne provoque pas de marquage c-Fos (groupe « gestantes
traitées véhicule uniquement »).
J-22
Les deux groupes témoins ; gestantes et non gestantes
(traitées ou non par le RU-486) sont perfusées. Pour les animaux
gestants, on compte le nombre d'embryons par branche de l'utérus.
9 L'expérience a exigé un travail de plus de 1 9h
dan une seule journée, pour cette raison la synchronisation des
naissances est indispensable
Perfusion
Les rates sont sacrifiés et anesthésiées
par une injection intra-péritonéale de penthiobarbital sodique
(55 mg/kg, Sanofi), puis perfusées via l'aorte avec 300 ml de tampon
phosphate salin (PBS, tampon phosphate 0,1M, pH=7,4, chlorure de sodium 0,9%)
afin d'éliminer le sang et 500 ml de paraformaldéhyde (Fluka)
à 4% dans du PBS afin de fixer les tissus.
La moelle épinière et le cerveau sont ensuite
prélevés et post-fixés 4 heures dans le même
fixateur, puis cryoprotégés 24 heures à 4°C dans une
solution de saccharose à 30% (D (+) sucrose, Fluka) dans du tampon
phosphate (PB) (0,1 M, pH=7,4).
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